| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 绪论 | 第13-24页 |
| 1. 水稻抗虫研究进展 | 第13-16页 |
| 2.二化螟研究进展 | 第16-21页 |
| 2.1 二化螟的分布及习性 | 第16-17页 |
| 2.2 我国历来的螟虫概况 | 第17-19页 |
| 2.3 二化螟灾害现状 | 第19-21页 |
| 3. RNA干涉抗虫的研究进展 | 第21-22页 |
| 4.本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第一章 运用二化螟内源目标序列培育RNA干涉抗虫水稻 | 第24-80页 |
| 1.前言 | 第24-37页 |
| 1.1 RNA干涉 | 第25-31页 |
| 1.1.1 dsRNA | 第25-28页 |
| 1.1.2 miRNAs | 第28-31页 |
| 1.1.3 piRNAs | 第31页 |
| 1.2 RNA干涉抗虫技术的研究进展 | 第31-37页 |
| 1.2.1 RNA干涉抗虫技术的萌芽 | 第33-36页 |
| 1.2.2 RNA干涉抗虫技术在植物中的尝试、应用和发展 | 第36-37页 |
| 2.研究的目的和意义 | 第37-38页 |
| 3.材料与方法 | 第38-60页 |
| 3.1 RNA干涉靶基因的选择 | 第38-39页 |
| 3.2 二化螟dsRNA体外喂饲 | 第39页 |
| 3.3 dsRNA干涉载体的构建 | 第39-42页 |
| 3.4 miRNA干涉载体的构建 | 第42-46页 |
| 3.5 水稻材料和菌株 | 第46页 |
| 3.6 水稻愈伤组织的农杆菌转化 | 第46-48页 |
| 3.7 转基因植株的阳性检测 | 第48-49页 |
| 3.8 转基因植株拷贝数检测 | 第49-52页 |
| 3.9 转基因植株dsRNA表达量检测 | 第52-54页 |
| 3.10 转基因植株miRNA表达量的检测 | 第54-56页 |
| 3.11 转基因植株农艺性状的考查 | 第56-57页 |
| 3.12 二化螟接虫试验 | 第57-58页 |
| 3.13 二化螟取食RNA干涉水稻后靶基因表达量的检测 | 第58-60页 |
| 4.结果与分析 | 第60-75页 |
| 4.1 二化螟dsRNA体外喂饲结果与靶基因的选择 | 第60-61页 |
| 4.2 RNA干涉转基因植株PCR阳性检测 | 第61-62页 |
| 4.3 RNA干涉转基因植株拷贝数检测 | 第62-63页 |
| 4.4 RNA干涉转基因植株表达量的检测 | 第63-64页 |
| 4.5 纯合阳性RNA干涉植株的筛选 | 第64页 |
| 4.6 RNA干涉植株的初步抗虫鉴定和重复验证结果 | 第64-68页 |
| 4.7 RNA干涉植株抗二化螟精细接虫鉴定结果 | 第68-74页 |
| 4.8 喂饲二化螟后靶基因表达量检测 | 第74页 |
| 4.9 家系的农艺性状考查 | 第74-75页 |
| 5.讨论 | 第75-80页 |
| 5.1 体外合成dsRNA喂饲与dsRNA干涉片段转基因喂饲 | 第75-77页 |
| 5.2 dsRNA和miRNA干涉效果比较 | 第77页 |
| 5.3 二化螟有效靶基因-VATP酶基因 | 第77-78页 |
| 5.4 二化螟系统性RNA干涉 | 第78-79页 |
| 5.5 VAE-miRNA-2 干涉片段对其他物种的RNA干涉作用 | 第79-80页 |
| 第二章 运用二化螟内源小RNA探索RNA干涉抗二化螟水稻 | 第80-121页 |
| 1.前言 | 第80-85页 |
| 1.1 miRNA的研究进展 | 第80-82页 |
| 1.2 miRNA的鉴定方法 | 第82-85页 |
| 1.3 miRNA在抗虫中的运用 | 第85页 |
| 2.研究的目的和意义 | 第85-86页 |
| 3.材料与方法 | 第86-96页 |
| 3.1 二化螟六个不同时期样品选择和收集 | 第86-87页 |
| 3.2 二化螟小RNA抽提 | 第87-88页 |
| 3.3 二化螟六个样本小RNA高通量测序 | 第88页 |
| 3.4 二化螟小RNA高通量测序结果生物信息学分析 | 第88-90页 |
| 3.5 茎环RT-PCR验证预测出的二化螟novel-miRNA | 第90页 |
| 3.6 qPCR验证预测出的二化螟novel-miRNA | 第90-91页 |
| 3.7 对茎环RT-PCR扩增出的novel-miRNA进行DNA测序验证 | 第91页 |
| 3.8 选择二化螟novel-miRNA作为RNA干涉片段 | 第91-92页 |
| 3.9 人工miRNA干涉载体的构建 | 第92-93页 |
| 3.10 水稻材料和菌株 | 第93页 |
| 3.11 水稻愈伤组织农杆菌转化 | 第93页 |
| 3.12 转基因植株阳性检测 | 第93页 |
| 3.13 转基因植株novel-miRNA干涉片段表达量检测 | 第93-94页 |
| 3.14 二化螟内源novel-miRNA干涉片段接虫试验 | 第94页 |
| 3.15 二化螟内源novel-miRNA干涉片段接虫后转录组测序 | 第94-96页 |
| 4.实验结果与分析 | 第96-116页 |
| 4.1 二化螟六个不同时期样品的收集 | 第96-97页 |
| 4.2 二化螟六个样本小RNA高通量测序结果 | 第97-98页 |
| 4.3 二化螟小RNA高通量测序生物信息学预测 | 第98-105页 |
| 4.3.1 二化螟六个样本保守小RNA鉴定 | 第98-99页 |
| 4.3.2 二化螟六个样本保守miRNA鉴定 | 第99-102页 |
| 4.3.3 二化螟六个样本novel miRNA鉴定 | 第102-104页 |
| 4.3.4 二化螟novel miRNA前体预测 | 第104-105页 |
| 4.3.5 二化螟novel miRNA靶基因预测 | 第105页 |
| 4.4 茎环RT-PCR验证二化螟novel miRNA | 第105-106页 |
| 4.5 qPCR验证二化螟novel miRNA | 第106-107页 |
| 4.6 茎环RT-PCR扩增出的novel miRNA进行DNA测序验证 | 第107-108页 |
| 4.7 novel miRNA干涉片段转基因植株PCR阳性检测 | 第108-109页 |
| 4.8 植株表达量检测 | 第109页 |
| 4.9 转基因植株初步抗虫鉴定 | 第109-112页 |
| 4.10 转基因植株精细抗虫鉴定 | 第112-114页 |
| 4.11 二化螟幼虫取食csu-15 水稻后转录组测序 | 第114-116页 |
| 5.讨论 | 第116-121页 |
| 5.1 测序片段长度分布 | 第116页 |
| 5.2 RNA干涉抗虫RNA干涉片段选择新思路 | 第116-117页 |
| 5.3 二化螟中肠novel miRNA | 第117-118页 |
| 5.4 二化螟系统性RNA干涉 | 第118页 |
| 5.5 novel miRNA-15 干涉片段靶基因 | 第118-119页 |
| 5.6 二化螟RNA干涉抗虫后续工作计划 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-136页 |
| 附录一 | 第136-138页 |
| 附录二 | 第138-143页 |
| 作者简介 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
