| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| LIST OF ABBREVIATIONS | 第12-14页 |
| CHAPTER ONE INTRODUCTION | 第14-19页 |
| 1.1 Problem Statement | 第14-17页 |
| 1.1.1 Nnt role in glucose metabolism | 第14-15页 |
| 1.1.2 Glucose metabolism and growth | 第15-16页 |
| 1.1.3 Energy metabolism and feed efficiency | 第16页 |
| 1.1.4 Nnt gene and human disease | 第16页 |
| 1.1.5 micro RNA 221 and 222 target 3`UTR | 第16-17页 |
| 1.2 Justification of the Study | 第17-18页 |
| 1.3 Objective of the Study | 第18-19页 |
| CHAPTER TWO LITERATURE REVIEW | 第19-43页 |
| 2.1 Mitochondria and energy | 第19-22页 |
| 2.1.1 Mitochondria structure and function | 第19-20页 |
| 2.1.2 Mitochondrial NADPH and energy | 第20-22页 |
| 2.2 Mitochondrial NADPH and Nicotinamide Nucleotide Transhydrogenase (NNT) | 第22页 |
| 2.3 Mitochondria and Reactive Oxygen Species (ROS) | 第22-23页 |
| 2.4 Nicotinamide nucleotide transhydrogenase and Energy metabolism | 第23页 |
| 2.5 Insulin signalling and the regulation of glucose | 第23-25页 |
| 2.6 Nnt gene and Disease | 第25-29页 |
| 2.6.1 Mouse as a model animal for biology | 第25-26页 |
| 2.6.2 The deletion mutaion of Nnt gene in C57BL/6J mice | 第26-27页 |
| 2.6.3 Nnt gene and Obesity | 第27-28页 |
| 2.6.4 Nnt gene and diabetes | 第28-29页 |
| 2.7 Glucose metabolism and animal feed efficiency | 第29-34页 |
| 2.7.1 Glucose transporters (GLUTs) and feed efficiency | 第31-33页 |
| 2.7.2 Insulin growth factors and feed efficiency | 第33-34页 |
| 2.7.3 Uncoupling proteins and feed efficiency | 第34页 |
| 2.8 micro RNAs in animal research | 第34-40页 |
| 2.8.1 microRNAs background | 第35-36页 |
| 2.8.2 microRNAs biogenesis | 第36-37页 |
| 2.8.3 microRNA and their targets databases | 第37-40页 |
| 2.9 MicroRNA-221-3p | 第40-41页 |
| 2.10 MicroRNA-222-3p | 第41-43页 |
| CHAPTER THREE MATERIALS AND METHODS | 第43-71页 |
| 3.1 Animals | 第43页 |
| 3.2 RNA Isolation | 第43-46页 |
| 3.2.1 RNA Preparation | 第44页 |
| 3.2.2 RNA isolation with Trizol reagent | 第44-46页 |
| 3.2.3 RNA qualification | 第46页 |
| 3.3 Reverse Transcription PCR (RT- PCR) | 第46-48页 |
| 3.3.1 Removal of genomic DNA from RNA preparations | 第46-47页 |
| 3.3.2 First Strand c DNA Synthesis | 第47-48页 |
| 3.4 Polymerase Chain Reaction (PCR) of Nnt gene | 第48-50页 |
| 3.4.1 Nnt mutation detection | 第48-49页 |
| 3.4.2 PCR Purification | 第49-50页 |
| 3.5 Nnt Phylogenetic Analysis | 第50页 |
| 3.6 Nnt Cloning | 第50-52页 |
| 3.7 Blood Glucose Measurement | 第52-53页 |
| 3.8 Quantitative Real- Time PCR Assay (q RT- PCR) | 第53-54页 |
| 3.8.1 Nnt Expression Pattern | 第53页 |
| 3.8.2 Validation of the expression of some genes related to glucose metabolism | 第53-54页 |
| 3.9 Nnt genotyping | 第54-57页 |
| 3.9.1 Genomic DNA Extraction | 第55-56页 |
| 3.9.2 Genotyping PCR | 第56-57页 |
| 3.10 Statistical Analysis | 第57页 |
| 3.11 microRNA-221/222-3p target plasmid construction | 第57-66页 |
| 3.11.1 micro RNA target Prediction | 第57-59页 |
| 3.11.2 Identification of 3-UTR of Nnt gene | 第59页 |
| 3.11.3 Amplification of Nnt 3-UTR | 第59-60页 |
| 3.11.4 PCR Purification | 第60-61页 |
| 3.11.5 Plasmid Cloning by Restriction Enzyme Digest | 第61-66页 |
| 3.12 Cell culture | 第66-69页 |
| 3.12.1 Grow cells from frozen stock | 第67-68页 |
| 3.12.2 C2C12 Transfection | 第68-69页 |
| 3.13 Dual-Luciferase Reporter Assay | 第69-71页 |
| CHAPTER FOUR RESULTS | 第71-86页 |
| 4.1 Nnt mutation detection | 第71-73页 |
| 4.2 The Phylogenetic Analysis of coding regions of Nnt gene | 第73-74页 |
| 4.3 The expression pattern of Nnt gene | 第74-75页 |
| 4.4 The blood glucose levels were different between B6J and Km mice | 第75-77页 |
| 4.5 The differences between the body weight of B6J and Km mice | 第77页 |
| 4.6 Association analysis of Nnt gene with growth and feed efficiency traits | 第77-80页 |
| 4.7 The variation of the blood glucose levels in F2 mice | 第80-81页 |
| 4.8 The expression of Nnt gene in the F2- FCR mice | 第81-82页 |
| 4.9 The expression of genes related to glucose metabolism in the liver tissue | 第82-83页 |
| 4.10 The expression of Nnt gene in C2C12 cells | 第83-84页 |
| 4.11 Nnt is a direct target of mi R-221 and mi R-222 | 第84-86页 |
| CHAPTER FIVE DISCUSSION | 第86-92页 |
| 5.1 Deletion mutation of Nnt in m RNA transcript Variant 2 | 第86-87页 |
| 5.2 Nnt expression in mice cells and tissues | 第87-88页 |
| 5.3 Impact of Nnt expression on glucose stability and metabolism | 第88页 |
| 5.4 Nnt association in glucose metabolism and feed effeciency | 第88-91页 |
| 5.5 Nnt regulation and mi R-221 and mi R-222 | 第91-92页 |
| CONCLUSION | 第92-93页 |
| REFERENCES | 第93-120页 |
| ACKNOWLEDGEMENT | 第120-121页 |
| APPENDIX | 第121-122页 |
