| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 叶片发育的演化进展 | 第11-12页 |
| 1.2 花型相关基因研究进展 | 第12-20页 |
| 1.2.1 花发育的ABC模型到A-E模型 | 第12-13页 |
| 1.2.2 CNX基因研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.3 HD-ZIPIII、AS2基因研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.4 KAN基因研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.5 KNX基因研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 病毒诱导基因沉默研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.1 VIGS的原理机制 | 第20页 |
| 1.3.2 TRV-VIGS系统 | 第20-21页 |
| 1.4 目的意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 病毒载体 | 第22-23页 |
| 2.1.3 菌种 | 第23页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第23-24页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 矮牵牛总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.1 实验器具的处理与药品配制 | 第25页 |
| 2.2.1.2 RNA提取步骤 | 第25-26页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.3 目的基因片段的克隆 | 第27-29页 |
| 2.2.3.1 引物的设计 | 第27页 |
| 2.2.3.2 引物工作液的稀释 | 第27页 |
| 2.2.3.3 PCR扩增与检测 | 第27-28页 |
| 2.2.3.4 PCR产物的回收 | 第28-29页 |
| 2.2.4 载体质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.5 构建重组载体 | 第30-32页 |
| 2.2.5.1 目的片段与载体连接 | 第30-31页 |
| 2.2.5.2 大肠杆菌DH5α 感受态的制备 | 第31页 |
| 2.2.5.3 连接产物导入大肠杆菌 | 第31-32页 |
| 2.2.5.4 阳性克隆的鉴定 | 第32页 |
| 2.2.5.5 重组质粒的抽提 | 第32页 |
| 2.2.6 重组载体导入农杆菌 | 第32-33页 |
| 2.2.6.1 农杆菌感受态的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.6.2 重组质粒导入农杆菌 | 第33页 |
| 2.2.7 农杆菌侵染矮牵牛植株 | 第33页 |
| 2.2.7.1 侵染液的配制 | 第33页 |
| 2.2.7.2 侵染方法 | 第33页 |
| 2.2.8 表型观察及材料处理 | 第33-35页 |
| 2.2.8.1 表型观察及拍照 | 第33-34页 |
| 2.2.8.2 观察花、叶衰老情况 | 第34页 |
| 2.2.8.3 台盼蓝染色观察 | 第34页 |
| 2.2.8.4 显微镜观察 | 第34-35页 |
| 2.2.8.5 扫描电镜观察 | 第35页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.2.9.1 荧光引物设计 | 第35页 |
| 2.2.9.2 荧光定量PCR方法 | 第35-36页 |
| 2.2.9.3 实验数据分析 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-48页 |
| 3.1 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1基因片段的克隆 | 第36-38页 |
| 3.1.1 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1特异片段序列的获得 | 第36-37页 |
| 3.1.2 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1目的片段的扩增 | 第37页 |
| 3.1.3 pTRV2和pTRV2-PhCHS载体质粒的提取 | 第37-38页 |
| 3.2 VIGS载体构建 | 第38-39页 |
| 3.3 重组载体导入农杆菌 | 第39-40页 |
| 3.4 VIGS沉默后表型观察 | 第40-48页 |
| 3.4.1 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1沉默对矮牵牛的影响 | 第40-44页 |
| 3.4.1.1 PhCNX5沉默对花型的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.1.2 PhCNX5沉默对叶的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.1.3 PhCNX5沉默对整体植株的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.1.4 PhCNX5沉默对生长素相关基因的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.2 PhPHV1沉默对矮牵牛的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 PhKNX2沉默对矮牵牛的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.4 PhAS2沉默对矮牵牛的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.4.1 PhAS2沉默对花型的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.4.2 PhAS2沉默对叶的影响 | 第47页 |
| 3.4.5 PhKAN1沉默对矮牵牛的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.5.1 PhKAN1沉默对花型的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.5.2 PhKAN1沉默对植株长势的影响 | 第48页 |
| 4 讨论与结论 | 第48-53页 |
| 4.1 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1.1 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1沉默对植株各器官变化的影响 | 第48-51页 |
| 4.1.2 PhCNX5、PhPHV1、PhKNX2、PhAS2和PhKAN1研究结果的新颖之处 | 第51页 |
| 4.1.3 下阶段工作 | 第51-52页 |
| 4.2 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
