| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1.1 TRIM28基因研究进展 | 第14-17页 |
| 1.1.1 TRIM28蛋白结构和翻译后修饰 | 第14-15页 |
| 1.1.2 TRIM28功能作用 | 第15-17页 |
| 1.2 DNA甲基化 | 第17-21页 |
| 1.2.1 甲基化和去甲基化 | 第17-19页 |
| 1.2.2 胚胎早期发育过程中重编程与DNA甲基化 | 第19页 |
| 1.2.3 基因印记中的DNA甲基化 | 第19-21页 |
| 1.3 体细胞克隆效率低下与DNA甲基化异常关系 | 第21-22页 |
| 1.4 本项目研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 试验研究 | 第23-54页 |
| 实验1 绵羊TRIM28基因克隆和组织表达检测 | 第23-32页 |
| 1 材料和方法 | 第23-27页 |
| 1.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 1.1.1 材料来源 | 第23页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 1.2.1 总RNA提取及cDNA合成 | 第24页 |
| 1.2.2 组织蛋白提取及浓度测定 | 第24-25页 |
| 1.2.3 绵羊TRIM28 cDNA的克隆 | 第25-26页 |
| 1.2.4 实时荧光定量PCR检测绵羊不同组织中TRIM28 mRNA表达量 | 第26页 |
| 1.2.5 Western Blot杂交检测绵羊不同组织中TRIM28蛋白表达量 | 第26-27页 |
| 2 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.1 绵羊TRIM28基因完整CDS序列 | 第27-28页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR检测TRIM28基因组织表达谱 | 第28-29页 |
| 2.3 RT-qPCR检测TRIM28相关互作基因在绵羊组织器官中的表达 | 第29-30页 |
| 2.4 Western Blot检测绵羊不同组织中TRIM28蛋白表达情况 | 第30页 |
| 3. 讨论 | 第30页 |
| 4. 结论 | 第30-32页 |
| 实验2 TRIM28对甲基化基因和印记基因表达的影响 | 第32-44页 |
| 1 材料和方法 | 第32-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 1.1.1 材料来源 | 第32页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 1.1.4 主要溶液及配置 | 第33页 |
| 1.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 1.2.1 引物设计及合成 | 第33-34页 |
| 1.2.2 构建真核过表达载体 | 第34页 |
| 1.2.3 pEGFP-C1-TRIM28去内毒素质粒的提取 | 第34-35页 |
| 1.2.4 绵羊成纤维细胞的培养 | 第35页 |
| 1.2.5 pEGFP-C1-TRIM28质粒电穿孔转染绵羊成纤维细胞 | 第35-36页 |
| 1.2.6 TRIM28过表达检测 | 第36-37页 |
| 1.2.7 siRNA的设计与合成 | 第37页 |
| 1.2.8 siRNA电转染绵羊成纤维细胞 | 第37页 |
| 1.2.9 siRNA干扰效率检测 | 第37页 |
| 2 实验结果 | 第37-42页 |
| 2.1 TRIM28真核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.2 绵羊成纤维细胞培养 | 第38-39页 |
| 2.3 电转染后细胞生长情况 | 第39页 |
| 2.4 RT-qPCR检测TRIM28 mRNA表达量 | 第39-40页 |
| 2.5 Western Blot检测TRIM28蛋白表达量 | 第40-41页 |
| 2.6 成纤维细细中TRIM28对甲基化基因表达的影响 | 第41页 |
| 2.7 成纤维细细中TRIM28对印记基因表达的影响 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 4 结论 | 第43-44页 |
| 实验3 TRIM28在早期克隆胚胎中表达及对甲基化影响 | 第44-54页 |
| 1 材料和方法 | 第44-50页 |
| 1.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1 材料来源 | 第44页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第44页 |
| 1.1.3 液体的配制 | 第44-45页 |
| 1.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 1.2.1 绵羊体细胞克隆胚胎收集 | 第45-46页 |
| 1.2.2 TRIM28在克隆胚胎中表达检测 | 第46-47页 |
| 1.2.3 印记基因甲基化检测 | 第47-50页 |
| 2 实验结果 | 第50-52页 |
| 2.1 收集克隆胚胎 | 第50页 |
| 2.2 胚胎发育不同时期TRIM28表达量 | 第50-51页 |
| 2.3 绵羊H19和IGF2基因DMR甲基化水平检测 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 第三章 结论与创新 | 第54-55页 |
| 1. 全文结论 | 第54页 |
| 2. 创新点 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64-65页 |
| 附件 | 第65页 |
