| 符号及缩略词 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-25页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)概述 | 第14页 |
| 1.2 PRRS的分子生物学特征及研究进展 | 第14-22页 |
| 1.2.1 分类地位 | 第14-15页 |
| 1.2.2 形态结构及理化性质 | 第15-16页 |
| 1.2.3 基因组结构 | 第16-17页 |
| 1.2.4 主要结构蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.5 PRRSV非结构蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.6 临床症状 | 第19-20页 |
| 1.2.7 PRRS的病理变化 | 第20-22页 |
| 1.3 PRRSV的致病机制与防治 | 第22-23页 |
| 1.3.1 PRRS的致病机制 | 第22页 |
| 1.3.2 PRRS的防治方法 | 第22-23页 |
| 1.4 蛋白质相互作用研究方法 | 第23-25页 |
| 1.4.1 免疫共沉淀 | 第23-24页 |
| 1.4.2 Pull Down | 第24页 |
| 1.4.3 其他蛋白质相互作用方法 | 第24-25页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-46页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 细胞、毒株及载体 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器及设备 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-46页 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 | 第26-28页 |
| 2.2.2 目的基因的获取 | 第28-31页 |
| 2.2.3 pET-28(a)-nsp4及pEGFP-C1-nsp4重组质粒的构建 | 第31-35页 |
| 2.2.4 原核nsp4蛋白的表达鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.5 原核nsp4重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| 2.2.6 多克隆抗体的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.7 多抗血清特异性的检测 | 第37页 |
| 2.2.8 重组质粒pEGFP-C1-nsp4的大量提取 | 第37-38页 |
| 2.2.9 重组质粒pEGFP-C1-nsp4转染 293T细胞 | 第38-40页 |
| 2.2.10 GFP-nsp4蛋白在 293T细胞内的表达及Western blot鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2.11 Pull down沉淀与nsp4互作的细胞蛋白及质谱分析 | 第41-43页 |
| 2.2.12 验证质谱分析结果 | 第43-44页 |
| 2.2.13 细胞蛋白与PRRSV共定位验证质谱结果 | 第44-45页 |
| 2.2.14 MYH10、SRCAP、TRIM28抗体免疫共沉淀验证质谱结果 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-59页 |
| 3.1 目的基因的获取及表达载体的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2 测序分析 | 第47-48页 |
| 3.3 原核His-nsp4原核重组蛋白的表达 | 第48页 |
| 3.4 nsp4重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 3.5 多抗血清特异性检测结果 | 第49-51页 |
| 3.5.1 重组蛋白nsp4抗血清的ELISA效价测定 | 第49-50页 |
| 3.5.2 Western blot鉴定结果 | 第50页 |
| 3.5.3 IFA结果 | 第50-51页 |
| 3.6 真核GFP-nsp4融合蛋白的表达与鉴定 | 第51-52页 |
| 3.6.1 GFP-nsp4融合蛋白的荧光检测 | 第51页 |
| 3.6.2 GFP-nsp4蛋白的Western blot检测 | 第51-52页 |
| 3.7 Pull down沉淀与nsp4互作的细胞蛋白及质谱分析 | 第52-53页 |
| 3.7.1 Western blot验证pull-down产物中GFP、GFP-nsp4的存在 | 第52页 |
| 3.7.2 质谱分析结果 | 第52-53页 |
| 3.8 验证质谱分析结果 | 第53-59页 |
| 3.8.1 Western blot验证结果 | 第53-54页 |
| 3.8.2 共定位验证结果 | 第54-58页 |
| 3.8.3 免疫共沉淀验证 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
