| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第16-40页 |
| 1.1 荧光假单胞菌 | 第16-17页 |
| 1.1.1 荧光假单胞菌的生物学特征 | 第16页 |
| 1.1.2 荧光假单胞菌与疾病 | 第16-17页 |
| 1.1.3 荧光假单胞菌研究现状 | 第17页 |
| 1.2 细菌毒力因子 | 第17-31页 |
| 1.2.1 细菌的铁吸收利用 | 第17-19页 |
| 1.2.2 丝氨酸蛋白酶 | 第19-21页 |
| 1.2.3 血红素加氧酶 | 第21-26页 |
| 1.2.4 TonB依赖型外膜受体 | 第26-27页 |
| 1.2.5 丝状血凝素 | 第27-31页 |
| 1.3 杀菌/通透性增加蛋白BPI | 第31-35页 |
| 1.3.1 鱼类天然免疫及研究现状 | 第31-32页 |
| 1.3.2 BPI的结构 | 第32-33页 |
| 1.3.3 BPI的功能 | 第33-34页 |
| 1.3.4 BPI与疾病 | 第34-35页 |
| 1.3.5 鱼类BPI研究现状 | 第35页 |
| 1.4 凝集素 | 第35-38页 |
| 1.4.1 凝集素的分布与结构 | 第35页 |
| 1.4.2 凝集素的分类 | 第35-36页 |
| 1.4.3 凝集素的功能 | 第36-37页 |
| 1.4.4 鱼类凝集素研究现状 | 第37-38页 |
| 1.5 本论文研究的目的及意义 | 第38-40页 |
| 第二章 缺铁胁迫下荧光假单胞菌全菌蛋白表达变化及毒力基因的功能研究 | 第40-67页 |
| 2.1 材料、方法及仪器设备 | 第40-52页 |
| 2.1.1 伦理规范 | 第40页 |
| 2.1.2 实验材料及仪器设备 | 第40-42页 |
| 2.1.3 细菌全蛋白样品制备 | 第42-43页 |
| 2.1.4 双向电泳 | 第43页 |
| 2.1.5 实时荧光定量PCR分析 | 第43页 |
| 2.1.6 敲除株TSS(35)hemO、TSSΔpspB、TSSΔsod和TSSΔtfeR的构建 | 第43-48页 |
| 2.1.7 生长曲线测定 | 第48页 |
| 2.1.8 细菌抗宿主血清杀菌能力测定 | 第48-49页 |
| 2.1.9 细菌组织侵染能力检测 | 第49页 |
| 2.1.10 细菌对宿主致死率的测定 | 第49页 |
| 2.1.11 重组蛋白原核表达纯化 | 第49-50页 |
| 2.1.12 疫苗保护效应 | 第50-51页 |
| 2.1.13 ELISA检测血清效价 | 第51页 |
| 2.1.14 rTfeR多克隆抗体制备 | 第51页 |
| 2.1.15 荧光显微实验 | 第51页 |
| 2.1.16 抗体封闭细菌粘附细胞实验 | 第51-52页 |
| 2.2 实验结果 | 第52-64页 |
| 2.2.1 蛋白质组学分析鉴定铁胁迫下TSS全蛋白表达变化 | 第52-57页 |
| 2.2.2 mRNA水平验证基因差异表达 | 第57-58页 |
| 2.2.3 分析并突变编码四种差异表达蛋白的基因 | 第58页 |
| 2.2.4 TSSΔhemO、TSSΔpspB、TSSΔsod和TSSΔtfeR的生物学功能 | 第58-62页 |
| 2.2.5 重组蛋白rTfeR和rPspB作为疫苗的潜力 | 第62-63页 |
| 2.2.6 rTfeR抗体与TSS的相互作用 | 第63-64页 |
| 2.2.7 抗rTfeR的血清对细菌感染的影响 | 第64页 |
| 2.3 讨论 | 第64-67页 |
| 第三章 缺铁胁迫下荧光假单胞菌外分泌蛋白表达变化及fha基因的功能研究 | 第67-88页 |
| 3.1 材料、方法及仪器设备 | 第67-71页 |
| 3.1.1 实验材料及仪器设备 | 第67页 |
| 3.1.2 制备荧光假单胞菌胞外蛋白 | 第67页 |
| 3.1.3 双向电泳、质谱分析鉴定 | 第67页 |
| 3.1.4 构建突变株TSSfha | 第67-68页 |
| 3.1.5 细菌粘附FG细胞能力的检测 | 第68页 |
| 3.1.6 细菌自凝集效应和胞外基质的产生 | 第68页 |
| 3.1.7 细菌运动性能力检测 | 第68-69页 |
| 3.1.8 细菌鞭毛检测 | 第69页 |
| 3.1.9 细菌生物膜形成能力检测 | 第69页 |
| 3.1.10 细菌凝血实验 | 第69页 |
| 3.1.11 抗宿主血清杀菌功能 | 第69页 |
| 3.1.12 组织侵染和对宿主致死率分析 | 第69-70页 |
| 3.1.13 蛋白原核表达纯化及抗体制备 | 第70页 |
| 3.1.14 免疫荧光显微观察TSS表面Pf_(Fha) | 第70页 |
| 3.1.15 免疫荧光显微观察rFha与FG细胞之间的作用 | 第70页 |
| 3.1.16 抗体血清封闭TSS侵染宿主实验 | 第70-71页 |
| 3.1.17 疫苗保护效应 | 第71页 |
| 3.2 实验结果 | 第71-85页 |
| 3.2.1 双向电泳分析 | 第71-75页 |
| 3.2.2 mRNA水平验证基因差异表达 | 第75-76页 |
| 3.2.3 分析鉴定Pf_(Fha) | 第76页 |
| 3.2.4 细菌运动性、鞭毛形成和自凝集效应 | 第76-77页 |
| 3.2.5 生长曲线、生物膜和细胞外基质产生 | 第77-79页 |
| 3.2.6 免疫荧光和粘附宿主细胞实验 | 第79-81页 |
| 3.2.7 Pf_(Fha)结合宿主细胞 | 第81-82页 |
| 3.2.8 凝集血细胞和在宿主血清中存活能力 | 第82-83页 |
| 3.2.9 突变株的体内实验 | 第83-85页 |
| 3.2.10 rFha的免疫保护效应 | 第85页 |
| 3.3 讨论 | 第85-88页 |
| 第四章 半滑舌鳎杀菌/通透性增加蛋白BPI抗菌功能研究 | 第88-105页 |
| 4.1 材料、方法及仪器设备 | 第88-92页 |
| 4.1.1 实验材料及仪器 | 第88页 |
| 4.1.2 序列分析 | 第88页 |
| 4.1.3 组织分布特异性 | 第88-89页 |
| 4.1.4 基因在病原刺激后的组织中表达 | 第89页 |
| 4.1.5 蛋白原核表达纯化 | 第89页 |
| 4.1.6 抗体制备 | 第89页 |
| 4.1.7 提取舌鳎外周血白细胞 | 第89-90页 |
| 4.1.8 CsBPI细胞定位 | 第90页 |
| 4.1.9 蛋白结合细菌实验 | 第90页 |
| 4.1.10 蛋白杀菌实验 | 第90-91页 |
| 4.1.11 rCsBPI破坏荧光假单胞菌TSS膜完整性 | 第91页 |
| 4.1.12 rCsBPI促进PBL吞噬荧光假单胞菌TSS | 第91页 |
| 4.1.13 rCsBPI调节半滑舌鳎体内免疫基因表达 | 第91页 |
| 4.1.14 rCsBPI促进鱼体抵抗微生物侵染 | 第91-92页 |
| 4.2 实验结果 | 第92-103页 |
| 4.2.1 CsBPI的序列特征 | 第92页 |
| 4.2.2 CsBPI在鱼组织中的表达模式 | 第92-95页 |
| 4.2.3 检测PBL中CsBPI的产生 | 第95-97页 |
| 4.2.4 rCsBPI与病原菌的相互作用 | 第97-98页 |
| 4.2.5 rCsBPI的杀菌活性 | 第98-99页 |
| 4.2.6 rCsBPI改变细菌膜结构完整性 | 第99-100页 |
| 4.2.7 rCsBPI促进PBL对TSS的吞噬 | 第100-101页 |
| 4.2.8 rCsBPI调节鱼体内免疫基因的表达 | 第101-102页 |
| 4.2.9 rCsBPI促进鱼体抵抗微生物感染 | 第102-103页 |
| 4.3 讨论 | 第103-105页 |
| 第五章 半滑舌鳎三种B型甘露糖特异性凝集素抗菌功能研究 | 第105-120页 |
| 5.1 材料、方法及仪器设备 | 第105-108页 |
| 5.1.1 实验材料及仪器 | 第105页 |
| 5.1.2 序列分析 | 第105页 |
| 5.1.3 组织分布特异性 | 第105页 |
| 5.1.4 基因在病原刺激后的组织中表达 | 第105页 |
| 5.1.5 蛋白原核表达纯化 | 第105-106页 |
| 5.1.6 蛋白结合细菌实验 | 第106-107页 |
| 5.1.7 蛋白凝集细菌实验 | 第107页 |
| 5.1.8 蛋白杀菌实验 | 第107-108页 |
| 5.1.9 蛋白促进鱼体内抵抗细菌侵染 | 第108页 |
| 5.2 实验结果 | 第108-117页 |
| 5.2.1 序列分析 | 第108-109页 |
| 5.2.2 基因在舌鳎组织中的表达模式 | 第109-111页 |
| 5.2.3 蛋白与细菌的结合 | 第111-113页 |
| 5.2.4 蛋白凝集细菌的能力 | 第113-115页 |
| 5.2.5 蛋白杀菌活性 | 第115页 |
| 5.2.6 蛋白对舌鳎抗细菌感染作用 | 第115-117页 |
| 5.3 讨论 | 第117-120页 |
| 第六章 结论与展望 | 第120-122页 |
| 6.1 结论 | 第120-121页 |
| 6.2 创新点 | 第121页 |
| 6.3 展望 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-145页 |
| 致谢 | 第145-146页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第146页 |
