| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 引言（综述） | 第11-23页 |
| 1.1 多不饱和脂肪酸的研究概述 | 第11-16页 |
| 1.1.1 多不饱和脂肪酸的分类及命名 | 第11-12页 |
| 1.1.2 多不饱和脂肪酸的主要来源 | 第12-13页 |
| 1.1.3 多不饱和脂肪酸的生物合成途径 | 第13-15页 |
| 1.1.4 多不饱和脂肪酸的主要生理功能 | 第15-16页 |
| 1.2 脂肪酸去饱和酶的研究概述 | 第16-19页 |
| 1.2.1 脂肪酸去饱和酶的分类、命名及分布 | 第16-17页 |
| 1.2.2 脂肪酸去饱和酶的结构 | 第17页 |
| 1.2.3 脂肪酸去饱和酶的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3 酵母表达系统 | 第19-22页 |
| 1.3.1 酿酒酵母表达系统 | 第19-20页 |
| 1.3.2 毕赤酵母表达系统 | 第20-21页 |
| 1.3.3 酵母表达外源基因时的影响因素 | 第21-22页 |
| 1.4 本项研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 Δ9脂肪酸去饱和酶在酵母中的表达 | 第23-55页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.3 试验方法 | 第27-44页 |
| 2.3.1 酿酒酵母Δ9脂肪酸去饱和酶基因表达的构建 | 第27-34页 |
| 2.3.2 毕赤酵母Δ9脂肪酸去饱和酶基因表达的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.3 酿酒酵母感受态细胞的制备、转化和诱导表达 | 第35-37页 |
| 2.3.4 毕赤酵母感受态细胞的制备、转化和诱导表达 | 第37-40页 |
| 2.3.5 酵母表达产物的检测 | 第40-44页 |
| 2.4 结果与分析 | 第44-53页 |
| 2.4.1 Δ9脂肪酸去饱和酶酿酒酵母表达载体的构建及表达 | 第44-48页 |
| 2.4.1.1 中华绒螯蟹Δ9-FAD开放阅读框的PCR扩增 | 第44-45页 |
| 2.4.1.2 ?9-FAD基因克隆质粒pMD19T-?9-FAD的菌液PCR结果 | 第45页 |
| 2.4.1.3 重组质粒pY-FAD9的构建与鉴定结果 | 第45-46页 |
| 2.4.1.4 阳性重组酿酒酵母菌株的筛选和鉴定结果 | 第46-48页 |
| 2.4.1.5 重组pY-FAD9酿酒酵母菌株表达结果 | 第48页 |
| 2.4.2 ?9脂肪酸去饱和酶酿毕赤母表达载体的构建及表达 | 第48-53页 |
| 2.4.2.1 中华绒螯蟹Δ9-FAD开放阅读框的PCR扩增 | 第48页 |
| 2.4.2.2 ?9-FAD基因克隆质粒pGEMT-?9-FAD的菌液PCR结果 | 第48-49页 |
| 2.4.2.3 重组质粒pPIC3.5k-?9-FAD的构建与鉴定结果 | 第49-52页 |
| 2.4.2.4 阳性重组毕赤酵母菌株的筛选和鉴定结果 | 第52页 |
| 2.4.2.5 重组pPIC3.5K-FAD9毕赤酵母菌株表达结果 | 第52-53页 |
| 2.5 讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 Δ6脂肪酸去饱和酶在酵母中的表达 | 第55-72页 |
| 3.1 引言 | 第55-56页 |
| 3.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 3.3 试验方法 | 第57-61页 |
| 3.3.1 酿酒酵母Δ6脂肪酸去饱和酶基因表达的构建及转化 | 第57-59页 |
| 3.3.2 毕赤酵母Δ6脂肪酸去饱和酶基因表达的构建及转化 | 第59-60页 |
| 3.3.3 酿酒酵母感受态细胞的制备、转化和诱导表达 | 第60-61页 |
| 3.3.4 毕赤酵母感受态细胞的制备、转化和诱导表达 | 第61页 |
| 3.3.5 酵母表达产物的检测 | 第61页 |
| 3.4 结果与分析 | 第61-70页 |
| 3.4.1 Δ6脂肪酸去饱和酶酿酒酵母表达载体的构建及表达 | 第61-65页 |
| 3.4.1.1 中华绒螯蟹Δ6-FAD开放阅读框的PCR扩增 | 第61-62页 |
| 3.4.1.2 ?6-FAD基因克隆质粒pMD19T-?6-FAD的菌液PCR结果 | 第62-63页 |
| 3.4.1.3 重组质粒pY-FAD6的构建与鉴定结果 | 第63-64页 |
| 3.4.1.4 阳性重组酿酒酵母菌株的筛选和鉴定结果 | 第64-65页 |
| 3.4.1.5 重组pY-FAD6酿酒酵母菌株表达结果 | 第65页 |
| 3.4.2 Δ6脂肪酸去饱和酶酿毕赤母表达载体的构建及表达 | 第65-70页 |
| 3.4.2.1 中华绒螯蟹Δ6-FAD开放阅读框的PCR扩增 | 第65-66页 |
| 3.4.2.2 ?6-FAD基因克隆质粒pGEMT-?6-FAD的菌液PCR结果 | 第66-67页 |
| 3.4.2.3 重组质粒pPIC ZαA-?6-FAD的构建与鉴定结果 | 第67-68页 |
| 3.4.2.4 阳性重组毕赤酵母菌株的筛选和鉴定结果 | 第68-69页 |
| 3.4.2.5 WesternBlot检测结果 | 第69-70页 |
| 3.5 讨论 | 第70-72页 |
| 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
