| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-30页 |
| 1.1 海洋生物概述 | 第11页 |
| 1.2 PHA简介 | 第11-13页 |
| 1.2.1 PHA的结构 | 第11-12页 |
| 1.2.2 PHA的种类以及生物合成途径 | 第12-13页 |
| 1.3 PHA的用途 | 第13-19页 |
| 1.3.1 生理功能 | 第13-14页 |
| 1.3.2 环保材料 | 第14-15页 |
| 1.3.3 医学材料 | 第15-16页 |
| 1.3.4 其他用途 | 第16-19页 |
| 1.4 PHA的生产策略 | 第19-21页 |
| 1.4.1 筛选菌种 | 第19页 |
| 1.4.2 发酵工程 | 第19-20页 |
| 1.4.3 代谢工程 | 第20-21页 |
| 1.4.4 转基因植物 | 第21页 |
| 1.5 PHB合成途径中的酶 | 第21-27页 |
| 1.5.1 β-酮基硫解酶(PhaA) | 第22页 |
| 1.5.2 乙酰乙酰辅酶A还原酶(PhaB) | 第22-23页 |
| 1.5.3 PHA聚合酶（PhaC） | 第23-27页 |
| 1.6 论文的意义和内容 | 第27-28页 |
| 1.6.1 研究背景及意义 | 第27页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第27-28页 |
| 1.7 PHA研究展望 | 第28-30页 |
| 第二章 产PHB菌株的筛选和鉴定以及甲醇浓度的优化 | 第30-51页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-34页 |
| 2.2.1 土壤样品 | 第30-31页 |
| 2.2.2 菌株 | 第31页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.4 培养基组成 | 第32-33页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-41页 |
| 2.3.1 样品的采集和处理 | 第34页 |
| 2.3.2 菌株的分离纯化 | 第34页 |
| 2.3.3 甲醇利用菌株的筛选和PHB的积累 | 第34-35页 |
| 2.3.4 菌体样品的预处理 | 第35页 |
| 2.3.5 PHB的气相检测 | 第35-36页 |
| 2.3.6 菌株的鉴定 | 第36-38页 |
| 2.3.7 菌种的保存 | 第38页 |
| 2.3.8 甲醇浓度的优化 | 第38-41页 |
| 2.4 实验结果 | 第41-49页 |
| 2.4.1 初筛的菌株 | 第41页 |
| 2.4.2 气相检测菌体中的PHB | 第41-43页 |
| 2.4.3 菌株的鉴定 | 第43-45页 |
| 2.4.4 甲醇浓度的优化 | 第45-49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-50页 |
| 2.6 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 phaA基因的克隆与酶分析 | 第51-68页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51-56页 |
| 3.2.1 菌株与质粒以及引物 | 第51-52页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第53-55页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第55页 |
| 3.2.5 培养基组成 | 第55-56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-63页 |
| 3.3.1 phaA基因的PCR扩增 | 第56页 |
| 3.3.2 原核表达载体的构建和鉴定 | 第56-59页 |
| 3.3.3 phaA的诱导表达 | 第59-60页 |
| 3.3.4 PhaA的纯化 | 第60-61页 |
| 3.3.5 PhaA的酶活及动力学数据的测定 | 第61-63页 |
| 3.4 实验结果 | 第63-66页 |
| 3.4.1 基因的PCR扩增 | 第63-64页 |
| 3.4.2 原核表达载体的构建 | 第64页 |
| 3.4.3 融合蛋白PhaA的诱导表达 | 第64-65页 |
| 3.4.4 纯化的PhaA | 第65页 |
| 3.4.5 PhaA的酶活及动力学数据 | 第65-66页 |
| 3.5 讨论 | 第66-67页 |
| 3.5.1 PhaA的酶活及动力学 | 第66页 |
| 3.5.2 PhaA的生物信息学分析 | 第66-67页 |
| 3.6 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 phaB基因的克隆与酶分析 | 第68-78页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 实验材料 | 第68-71页 |
| 4.2.1 菌株与质粒及引物 | 第68-69页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第69-70页 |
| 4.2.3 溶液配制 | 第70-71页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第71页 |
| 4.2.5 培养基组成 | 第71页 |
| 4.3 实验方法 | 第71-73页 |
| 4.3.1 phaB基因的扩增 | 第71页 |
| 4.3.2 载体构建和鉴定 | 第71-72页 |
| 4.3.3 PhaB的诱导表达 | 第72页 |
| 4.3.4 PhaB的纯化 | 第72页 |
| 4.3.5 PhaB酶活及动力学数据的测定 | 第72-73页 |
| 4.4 实验结果 | 第73-75页 |
| 4.4.1 扩增的基因 | 第73页 |
| 4.4.2 构建的载体 | 第73-74页 |
| 4.4.3 诱导表达的PhaB | 第74页 |
| 4.4.4 纯化的PhaB | 第74-75页 |
| 4.4.5 PhaB的酶活及动力学数据 | 第75页 |
| 4.5 讨论 | 第75-77页 |
| 4.5.1 PhaB酶活及动力学 | 第75-76页 |
| 4.5.2 PhaB的生物信息学分析 | 第76-77页 |
| 4.6 本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 phaC基因的克隆与酶分析及定点突变 | 第78-95页 |
| 5.1 引言 | 第78页 |
| 5.2 实验材料 | 第78-81页 |
| 5.2.1 菌株、质粒、引物 | 第78-79页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第79-81页 |
| 5.2.3 溶液配制 | 第81页 |
| 5.2.4 实验仪器 | 第81页 |
| 5.2.5 培养基组成 | 第81页 |
| 5.3 实验方法 | 第81-85页 |
| 5.3.1 phaC基因的扩增 | 第81-82页 |
| 5.3.2 载体的构建和鉴定 | 第82页 |
| 5.3.3 PhaC的诱导表达 | 第82页 |
| 5.3.4 PhaC的纯化 | 第82页 |
| 5.3.5 PhaC酶活及动力学数据的测定 | 第82-83页 |
| 5.3.6 PhaC三个关键氨基酸的定点突变 | 第83-85页 |
| 5.4 实验结果 | 第85-91页 |
| 5.4.1 扩增的基因 | 第85-86页 |
| 5.4.2 构建的载体 | 第86页 |
| 5.4.3 phaC的诱导表达 | 第86-87页 |
| 5.4.4 纯化的PhaC | 第87页 |
| 5.4.5 PhaC酶活及动力学数据 | 第87-88页 |
| 5.4.6 PhaC三个关键氨基酸的定点突变 | 第88-91页 |
| 5.5 讨论 | 第91-94页 |
| 5.5.1 PhaC酶活及动力学数据 | 第91页 |
| 5.5.2 PhaC生物信息学分析 | 第91-93页 |
| 5.5.3 PhaC三个氨基酸突变 | 第93-94页 |
| 5.6 本章小结 | 第94-95页 |
| 第六章 结论与展望 | 第95-97页 |
| 6.1 主要结论 | 第95页 |
| 6.2 创新点 | 第95-96页 |
| 6.3 展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-106页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第106-109页 |
| 致谢 | 第109页 |