| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 多酶级联反应 | 第11-13页 |
| 1.1.1 多酶级联反应概述 | 第11页 |
| 1.1.2 多酶级联反应的分类 | 第11-13页 |
| 1.1.3 多酶级联反应的应用 | 第13页 |
| 1.2 多酶组装 | 第13-18页 |
| 1.2.1 多酶组装的简述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 多酶组装的方式 | 第14-17页 |
| 1.2.3 蛋白支架组装的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 相互作用蛋白对 | 第18-20页 |
| 1.3.1 纤维小体 | 第18-19页 |
| 1.3.2 人工相互作用蛋白 | 第19-20页 |
| 1.4 纤维素酶 | 第20-21页 |
| 1.4.1 纤维素酶的性质及应用 | 第20-21页 |
| 1.4.2 纤维素酶的研究进展 | 第21页 |
| 1.5 本论文主要研究内容 | 第21-23页 |
| 第2章 筛选相互作用蛋白 | 第23-39页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.1.1 生物膜干涉法 | 第23页 |
| 2.1.2 凝胶过滤色谱 | 第23-24页 |
| 2.1.3 非变性蛋白电泳 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 实验菌种与质粒 | 第24页 |
| 2.2.2 PCR引物 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.4 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.2.5 培养基和缓冲液 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第27-30页 |
| 2.3.2 蛋白表达纯化 | 第30-32页 |
| 2.3.3 相互作用蛋白对亲和力测定 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第33-37页 |
| 2.4.1 相互作用蛋白构建表达 | 第33-34页 |
| 2.4.2 相互作用蛋白纯化 | 第34-35页 |
| 2.4.3 相互作用验证 | 第35-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-39页 |
| 第3章 纤维素酶与相互作用蛋白融合 | 第39-53页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-43页 |
| 3.2.1 实验菌株与质粒 | 第39-40页 |
| 3.2.2 扩增引物 | 第40-41页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第42页 |
| 3.2.5 培养基与缓冲液 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.3.1 质粒构建 | 第43页 |
| 3.3.2 无缝克隆 | 第43-45页 |
| 3.3.3 葡聚糖酶酶活测定 | 第45-46页 |
| 3.3.4 β-葡萄糖苷酶酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第47-52页 |
| 3.4.1 内切葡聚糖酶EG与相互作用蛋白IPb融合 | 第47-48页 |
| 3.4.2 β-葡萄糖苷酶BGL与相互作用蛋白IPa融合 | 第48-49页 |
| 3.4.3 纤维素酶与相互作用蛋白融合表达 | 第49-50页 |
| 3.4.4 基因融合对内切葡聚糖酶ce1CCA活性影响 | 第50-51页 |
| 3.4.5 基因融合对外切葡聚糖酶ce1CCE活性影响 | 第51页 |
| 3.4.6 筛选β-葡萄糖苷酶ce12454融合酶 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第4章 蛋白支架构建 | 第53-59页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-55页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第53页 |
| 4.2.2 扩增引物 | 第53-54页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第54页 |
| 4.2.4 主要仪器 | 第54-55页 |
| 4.2.5 培养基与缓冲液 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-56页 |
| 4.3.1 质粒构建 | 第55页 |
| 4.3.2 多酶组装 | 第55页 |
| 4.3.3 还原糖产量测定 | 第55-56页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第56-58页 |
| 4.4.1 两蛋白支架的构建 | 第56页 |
| 4.4.2 三蛋白支架的构建 | 第56-57页 |
| 4.4.3 支架顺序选择 | 第57-58页 |
| 4.5 本章小结 | 第58-59页 |
| 第5章 多酶组装效果评价 | 第59-64页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 实验材料 | 第59-60页 |
| 5.2.1 主要试剂 | 第59页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第59-60页 |
| 5.2.3 缓冲液 | 第60页 |
| 5.3 实验方法 | 第60-61页 |
| 5.3.1 高效液相色谱 | 第60页 |
| 5.3.2 大分子相互作用仪 | 第60页 |
| 5.3.3 葡萄糖含量测定 | 第60-61页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第61-63页 |
| 5.4.1 双酶复合物验证 | 第61页 |
| 5.4.2 双酶复合物协同性评价 | 第61-62页 |
| 5.4.3 三酶复合物验证 | 第62页 |
| 5.4.4 三酶复合物协同性评价 | 第62-63页 |
| 5.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第6章 总结与展望 | 第64-66页 |
| 6.1 课题总结 | 第64页 |
| 6.2 课题展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 攻读学位期间发表论文的情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
