| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-20页 |
| 1 昆虫的免疫防御 | 第8页 |
| 2 酚氧化酶原激活系统 | 第8-9页 |
| 3 丝氨酸蛋白酶抑制因子 | 第9-11页 |
| 4 储存蛋白 | 第11-14页 |
| 4.1 储存蛋白的生物特性 | 第11-12页 |
| 4.2 储存蛋白的分子结构 | 第12页 |
| 4.3 储存蛋白的功能 | 第12-14页 |
| 4.3.1 蛋白质和氨基酸的储存库 | 第12-13页 |
| 4.3.2 参与昆虫表皮的形成 | 第13页 |
| 4.3.3 储存蛋白的载体功能 | 第13页 |
| 4.3.4 储存蛋白的其它功能 | 第13-14页 |
| 5 研究目的和意义 | 第14-15页 |
| 参考文献 | 第15-20页 |
| 第二章 亚洲玉米螟丝氨酸蛋白酶抑制因子Serpinl组织分布 | 第20-30页 |
| 1 前言 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-25页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第21页 |
| 2.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2.4 血清和血细胞的收集 | 第22页 |
| 2.5 中肠、脂肪体、体壁组织制备 | 第22-23页 |
| 2.6 蛋白浓度测定 | 第23页 |
| 2.7 间接免疫荧光标记血细胞 | 第23页 |
| 2.8 Serpinl蛋白的Western blot鉴定 | 第23-24页 |
| 2.9 胶体金标记免疫电镜 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 3.1 亚洲玉米螟幼虫血细胞间接免疫荧光标记 | 第25-26页 |
| 3.2 亚洲玉米螟幼虫血淋巴、中肠、脂肪体、体壁Western blot鉴定 | 第26页 |
| 3.3 亚洲玉米螟幼虫中肠、脂肪体、体壁胶体金免疫电镜检测 | 第26-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 4.1 Serpinl在幼虫体壁、中肠、脂肪体的免疫组化分析 | 第28-29页 |
| 4.2 免疫荧光标记实验及Western blot实验的优化 | 第29-30页 |
| 第三章 亚洲玉米螟储存蛋白SP的克隆和表达 | 第30-46页 |
| 1 前言 | 第30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-37页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第30页 |
| 2.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.3 主要仪器 | 第31页 |
| 2.4 总RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.5 cDNA第一链的合成 | 第32页 |
| 2.6 亚洲玉米螟幼虫玉米螟存储蛋白SP全长表达载体的构建 | 第32-36页 |
| 2.6.1 引物设计与合成 | 第32页 |
| 2.6.2 Of-SP基因全长表达片段的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.6.3 目的基因片段的回收纯化 | 第33页 |
| 2.6.4 目的片段与克隆载体连接 | 第33-34页 |
| 2.6.5 连接载体转化 | 第34页 |
| 2.6.6 单菌落PCR检测 | 第34页 |
| 2.6.7 阳性克隆菌株中质粒DNA提取 | 第34-35页 |
| 2.6.8 双酶切以及Of-SP表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.7 重组表达条件优化 | 第36页 |
| 2.8 SP融合蛋白的表达 | 第36-37页 |
| 2.8.1 小规模SP融合蛋白表达条件优化 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-44页 |
| 3.1 亚洲玉米螟幼虫SP全长基因原核表达载体的构建 | 第37-40页 |
| 3.1.1 SP基因全长cDNA的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 3.1.2 Of-SP PCR产物割胶回收及与克隆载体的连接和鉴定 | 第38页 |
| 3.1.3 Of-SP克隆载体质粒DNA的提取、回收连接 | 第38-40页 |
| 3.1.4 原核表达载体的构建 | 第40页 |
| 3.2 pET-28b-Of-SP原核表达条件的筛选 | 第40-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 储存蛋白的结构及其功能分析 | 第44-45页 |
| 4.1.1 储存蛋白的结构 | 第44页 |
| 4.1.2 储存蛋白的功能 | 第44-45页 |
| 4.2 构建SP原核表达的意义 | 第45-46页 |
| 4.3 展望 | 第46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
