| 资助项目 | 第1-3页 |
| 摘要 | 第3-5页 |
| Summary | 第5-8页 |
| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第8-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1 玉米转基因技术的研究现状 | 第14-19页 |
| ·玉米转基因的主要方法 | 第14-17页 |
| ·农杆菌介导的转化方法 | 第14-16页 |
| ·基因枪转化方法 | 第16页 |
| ·花粉管通道转化方法 | 第16-17页 |
| ·玉米转基因的受体 | 第17-18页 |
| ·玉米转基因的载体 | 第18页 |
| ·In-Fusion 克隆技术在载体构建中的应用 | 第18-19页 |
| 2 玉米转基因技术的应用 | 第19-24页 |
| ·耐除草剂的转基因玉米 | 第20-21页 |
| ·抗病的转基因玉米 | 第21-22页 |
| ·耐旱和盐碱的转基因玉米 | 第22-23页 |
| ·转基因玉米品质的改良 | 第23页 |
| ·玉米转基因技术的其它应用 | 第23-24页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 4 研究技术路线 | 第25-26页 |
| 第2章 抗双链RNA 依赖性蛋白激酶PKR 基因表达载体的构建 | 第26-51页 |
| 1 材料和方法 | 第26-39页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·菌种和质粒 | 第26页 |
| ·工具酶和试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-39页 |
| ·pCAMBIA5300 基础载体质粒DNA 碱法大提 | 第27-28页 |
| ·目的基因的扩增 | 第28-30页 |
| ·目的基因的回收 | 第30页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA5300 的改造 | 第30-35页 |
| ·载体pCAMBIA5300 双酶切及纯化 | 第30-31页 |
| ·In-Fusion T-border 序列与线性pCAMBIA5300 载体重组及转化 | 第31-32页 |
| ·重组添加左边界T-border 序列载体质粒pCAMBIA5300 的验证与保存 | 第32页 |
| ·重组载体pCAMBIA5300 的AatⅡ单酶切 | 第32-33页 |
| ·In-Fusion EPSPS 基因与线性pCAMBIA5300 载体重组及转化 | 第33页 |
| ·重组质粒pCAMBIA5300-CaMV35S-EPSPS 的验证与保存 | 第33-35页 |
| ·PKR-EPSPS 双价植物表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·中间载体pCAMBIA5300-EPSPS 的BamHI 单酶切 | 第35页 |
| ·In-Fusion PKR 基因与线性pCAMBIA5300-EPSPS 载体重组及转化 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pCAMBIA5300-Ubi-PKR-CaMV35S-EPSPS 的验证与保存 | 第36-37页 |
| ·中间载体pCAMBIA5300-CaMV35S-EPSPS 电击转化根癌农杆菌及鉴定 | 第37-38页 |
| ·双价植物表达载体pCAMBIA5300-Ubi-PKR-CaMV35S-EPSPS 转化农杆菌及鉴定 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-49页 |
| ·目的基因的扩增结果 | 第39-40页 |
| ·载体pCAMBIA5300 的改造 | 第40-47页 |
| ·PKR -EPSPS 双价植物表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·中间载体pCAMBIA5300-EPSPS 转化根癌农杆菌及鉴定 | 第48页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA5300-PKR-EPSPS 转化农杆菌并鉴定 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 第3章 农杆菌介导玉米茎尖遗传转化 | 第51-68页 |
| 1 材料和方法 | 第53-57页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·玉米材料 | 第53页 |
| ·试剂与仪器 | 第53页 |
| ·转化的菌株和载体 | 第53-54页 |
| ·转化的培养基 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-57页 |
| ·转化的农杆菌保存及培养 | 第54-55页 |
| ·除草剂筛选浓度的选定 | 第55页 |
| ·农杆菌转化玉米茎尖 | 第55页 |
| ·转化苗的移栽和除草剂筛选 | 第55页 |
| ·农杆菌介导玉米茎尖转化体系的优化 | 第55-56页 |
| ·转基因玉米植株的分子检测 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-65页 |
| ·转化玉米植株对草甘膦的抗性及适宜筛选浓度的确定 | 第57页 |
| ·抗性植株的获得 | 第57-58页 |
| ·农杆菌菌液浓度对转化率的影响 | 第58-59页 |
| ·农杆菌侵染时间对转化率的影响 | 第59-60页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)浓度转化率的影响 | 第60-61页 |
| ·真空渗透对转化率的影响 | 第61页 |
| ·表面活性剂（Silweet L-77）浓度对转化率的影响 | 第61-62页 |
| ·转基因玉米植株分子检测 | 第62-65页 |
| ·转基因玉米植株DNA 小量提取 | 第62页 |
| ·掖478、昌7-2T0 代转基因玉米植株PCR 检测 | 第62-63页 |
| ·掖478T1 代转基因种子的获得及植株PCR 检测 | 第63-64页 |
| ·昌7-2T1 代转基因种子的获得 | 第64-65页 |
| 3 讨论 | 第65-68页 |
| ·农杆菌菌液浓度侵染时间对遗传转化的影响 | 第65页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)对遗传转化的影响 | 第65-66页 |
| ·真空渗透和表面活性剂（Silweet L-77）对遗传转化的影响 | 第66页 |
| ·玉米遗传转化的受体 | 第66-67页 |
| ·掖478T0 代转基因植株及其后代的分子检测 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 作者简介 | 第80-81页 |
| 导师简介 | 第81-82页 |
