| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 1 引言 | 第10-22页 |
| 1.1 绵羊肺腺瘤概述 | 第10页 |
| 1.2 绵羊肺腺瘤病毒 | 第10-12页 |
| 1.3 JSRV囊膜蛋白 | 第12页 |
| 1.4 JSRV囊膜蛋白引起的致癌信号通路 | 第12-15页 |
| 1.5 研究OPA发病机制的实验方法 | 第15-18页 |
| 1.5.1 羔羊体内疾病模型 | 第15-17页 |
| 1.5.2 自然感染的OPA | 第17页 |
| 1.5.3 小鼠体内肿瘤模型 | 第17-18页 |
| 1.5.4 体外细胞培养模型 | 第18页 |
| 1.5.5 OPA的体外肺片模型 | 第18页 |
| 1.6 细胞转染 | 第18-19页 |
| 1.7 检测细胞增殖的方法 | 第19-21页 |
| 1.7.1 检测代谢活性 | 第19-20页 |
| 1.7.2 检测DNA合成 | 第20页 |
| 1.7.3 检测ATP浓度 | 第20-21页 |
| 1.7.4 检测增殖标志 | 第21页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 试验一 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白真核表达载体pcDNA4/myc-His/exJSRV-env构建及鉴定 | 第22-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 设计引物 | 第23页 |
| 2.2.2 exJSRV-env的克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.3 目的基因的纯化 | 第24页 |
| 2.2.4 S组质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-enw的构建及鉴定 | 第24-26页 |
| 2.3 结果 | 第26-28页 |
| 2.3.1. exJSRV-env的克隆 | 第26页 |
| 2.3.2 pcDNA4/myc-His/exJSRV-env构建及鉴定结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3 测序结果 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 3 试验二 pcDNA4/myc-His-exJSRV-env瞬时转染NIH3T3细胞 | 第29-34页 |
| 3.1 试验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第29页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第29-30页 |
| 3.2 试验方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 复苏NIH3T3细胞 | 第30页 |
| 3.2.2 细胞传代 | 第30页 |
| 3.2.3 pcDNA4/myc-His/exJSRV-env瞬时转染NIH3T3细胞 | 第30页 |
| 3.2.4 细胞转染后exJSRV-env mRNA表达的检测 | 第30-31页 |
| 3.2.5 Western blot检测Env在NIH 3T3细胞中的表达 | 第31-32页 |
| 3.3 结果 | 第32-33页 |
| 3.3.1 pcDNA4/myc-His/exJSRV-env转染NIH3T3细胞后目的基因的检测 | 第32页 |
| 3.3.2 Western blot检测Env的表达情况 | 第32-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-34页 |
| 4 试验三 瞬时转染pcDNA4/myc-His-exJSRV-env对NIH3T3细胞的影响 | 第34-40页 |
| 4.1 试验材料 | 第34页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第34页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 4.2 试验方法 | 第34-35页 |
| 4.2.1 CCK8法检测细胞体外增殖能力 | 第34页 |
| 4.2.2 平板克隆形成实验 | 第34页 |
| 4.2.3 Western blot检测EGFR | 第34-35页 |
| 4.3 结果 | 第35-38页 |
| 4.3.1 CCK8法检测细胞增殖 | 第35-36页 |
| 4.3.2 平板克隆形成实验 | 第36-37页 |
| 4.3.3 Western blot检测EGFR | 第37-38页 |
| 4.4 讨论 | 第38-40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
