摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
前言 | 第12-13页 |
文献综述 | 第13-22页 |
第一章 cGAS/STING在抗病毒免疫中的调控作用 | 第13-22页 |
1.1 cGAS/STING通路简介 | 第14-18页 |
1.1.1 cGAS | 第14-15页 |
1.1.2 STING | 第15-17页 |
1.1.3 cGAS/STING通路 | 第17-18页 |
1.2 cGAS/STING通路在抗病毒免疫中的作用与调控机制 | 第18-19页 |
1.2.1 cGAS/STING在病毒诱导的I型干扰素产生中的作用 | 第18页 |
1.2.2 cGAS/STING对不同病毒复制的影响 | 第18-19页 |
1.3 cGAS/STING通路对PCV2感染的调控作用 | 第19-20页 |
1.3.1 PCV2简介 | 第19-20页 |
1.3.2 PCV2的复制及致病特征 | 第20页 |
1.3.3 cGAS/STING通路在抗PCV2感染中的作用 | 第20页 |
1.4 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
试验研究 | 第22-58页 |
第二章 cGAS、sting基因敲除细胞的构建和鉴定 | 第22-46页 |
2.1 试剂材料 | 第22-24页 |
2.1.1 细胞、质粒 | 第22页 |
2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
2.1.2 主要仪器 | 第23页 |
2.1.3 主要试剂配制 | 第23-24页 |
2.2 方法 | 第24-34页 |
2.2.1 重组目的质粒的构建 | 第24-25页 |
2.2.2 慢病毒包装 | 第25-26页 |
2.2.3 慢病毒滴度测定 | 第26-28页 |
2.2.4 嘌呤霉素最适浓度的确定 | 第28页 |
2.2.5 筛选稳定感染的阳性细胞 | 第28-29页 |
2.2.6 慢病毒感染后细胞形态变化及活性检测 | 第29页 |
2.2.7 Western Blotting检测 | 第29-31页 |
2.2.8 细胞基因组测序鉴定 | 第31-34页 |
2.3 结果与分析 | 第34-44页 |
2.3.1 cGAS基因和sting基因敲除位点的确定 | 第34-38页 |
2.3.2 双酶切鉴定 | 第38页 |
2.3.3 慢病毒滴度测定结果 | 第38-39页 |
2.3.4 慢病毒感染细胞形态及活力变化 | 第39-41页 |
2.3.5 Western blotting检测慢病毒感染细胞的cGAS基因和sting基因敲除情况 | 第41-42页 |
2.3.6 细胞基因组测序 | 第42-44页 |
2.4 讨论 | 第44-45页 |
2.5 小结 | 第45-46页 |
第三章 cGAS/STING缺失对PCV2感染PK-15 细胞抗病毒免疫的影响 | 第46-58页 |
3.1 试剂材料 | 第46-47页 |
3.1.1 主要试剂 | 第46-47页 |
3.1.2 主要仪器 | 第47页 |
3.1.3 试验溶液的配制 | 第47页 |
3.2 方法 | 第47-50页 |
3.2.1 PCV2增殖以及滴度测定 | 第47-48页 |
3.2.2 Real-time PCR/ELISA检测IFN-β 的变化 | 第48-49页 |
3.2.3 Realtime PCR/ELISA检测IL-6 分泌的变化 | 第49页 |
3.2.4 Realtime PCR/ELISA检测IL-1β 分泌的变化 | 第49页 |
3.2.5 cGAS/STING对PCV2复制的影响 | 第49-50页 |
3.2.6 统计分析 | 第50页 |
3.3 结果与分析 | 第50-56页 |
3.3.1 PCV2滴度测定结果 | 第50-51页 |
3.3.2 PCV2感染后PK-15 细胞中IFN-β、IL-6、IL-1β 的动力学变化 | 第51-52页 |
3.3.3 cGAS/STING对PCV2感染细胞中IFN-β 表达的影响 | 第52-53页 |
3.3.4 cGAS/STING对PCV2感染细胞中IL-6 表达的影响 | 第53-54页 |
3.3.5 cGAS/STING对PCV2感染细胞中IL-1β 表达的影响 | 第54-55页 |
3.3.6 cGAS/STING对PCV2复制的影响 | 第55-56页 |
3.4 讨论 | 第56-57页 |
3.5 小结 | 第57-58页 |
结论与创新点 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-63页 |
主要缩略词和中英文对照表(Abbreviation Index) | 第63-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
作者简介 | 第66页 |