| 摘要 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1 哺乳动物毛色的形成机制 | 第13-21页 |
| 1.1 哺乳动物色素形成的机制 | 第13-16页 |
| 1.1.1 黑色素的形成机制 | 第13-14页 |
| 1.1.1.1 黑色素的分类 | 第13页 |
| 1.1.1.2 黑色素的功能 | 第13页 |
| 1.1.1.3 黑色素的合成 | 第13-14页 |
| 1.1.2 黑色素细胞的生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 黑色素细胞的起源及生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 黑色素细胞的功能 | 第15-16页 |
| 1.2 动物色素合成的信号通路 | 第16-21页 |
| 1.2.1 MC1R/(Gs-AC)/PKA信号通路 | 第16-18页 |
| 1.2.2 Wnt/β-catenin信号通路 | 第18-19页 |
| 1.2.3 MAPK信号通路 | 第19-20页 |
| 1.2.4 G蛋白偶联信号通路 | 第20-21页 |
| 2 动物毛囊与毛色的形成 | 第21-25页 |
| 2.1 哺乳动物毛囊的产生 | 第21-22页 |
| 2.2 哺乳动物毛囊的基本结构 | 第22-25页 |
| 2.2.1 哺乳动物毛囊的结构特征 | 第22-23页 |
| 2.2.2 毛囊的特点 | 第23页 |
| 2.2.3 毛囊具有周期性 | 第23-24页 |
| 2.2.3.1 毛囊具有周期性的相关理论 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 毛囊周期性变化的分子调控 | 第24页 |
| 2.2.4 毛囊和毛色形成的关系 | 第24-25页 |
| 3 iTRAQ技术的发展简介 | 第25-28页 |
| 3.1 iTRAQ技术的概述 | 第25-27页 |
| 3.1.1 iTRAQ技术的提出 | 第25-26页 |
| 3.1.2 iTRAQ技术的原理 | 第26-27页 |
| 3.1.2.1 技术简介 | 第26页 |
| 3.1.2.2 iTRAQ技术的操作流程 | 第26-27页 |
| 3.1.2.3 技术优势 | 第27页 |
| 3.2 iTRAQ技术在生命科学中的应用 | 第27-28页 |
| 4 研究目的、意义与内容 | 第28-30页 |
| 参考文献 | 第30-35页 |
| 第二章 Gnαs和Gnα11基因在不同毛色绵羊皮肤组织中的表达分析 | 第35-57页 |
| 1 试验材料与方法 | 第35-47页 |
| 1.1 试验动物及样品采集 | 第35页 |
| 1.2 试验试剂、耗材及仪器 | 第35-39页 |
| 1.2.1 试验试剂及耗材 | 第35-37页 |
| 1.2.1.1 组织RNA提取及实时荧光定量所用的试剂及耗材 | 第35-36页 |
| 1.2.1.2 蛋白免疫印迹所用的试剂及耗材 | 第36-37页 |
| 1.2.1.3 免疫组织化学和免疫荧光所用的试剂及耗材 | 第37页 |
| 1.2.2 试验仪器 | 第37-39页 |
| 1.2.2.1 组织RNA提取及实时荧光定量所用的仪器 | 第37-38页 |
| 1.2.2.2 蛋白免疫印迹所用的仪器 | 第38-39页 |
| 1.2.2.3 免疫组织化学和免疫荧光所用仪器 | 第39页 |
| 1.3 试验方法 | 第39-47页 |
| 1.3.1 不同毛色绵羊皮肤总RNA的提取及鉴定 | 第39-40页 |
| 1.3.1.1 不同毛色绵羊皮肤组织总RNA的提取 | 第39页 |
| 1.3.1.2 反转录合成cDNA | 第39-40页 |
| 1.3.2 Gnαs和Gnα11 mRNA在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第40-42页 |
| 1.3.2.1 普通PCR的扩增 | 第40-41页 |
| 1.3.2.2 实时荧光定量 | 第41-42页 |
| 1.3.3 Gnαs和Gnα11蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第42-44页 |
| 1.3.4 Gnαs和Gnα11蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的定位分析 | 第44-47页 |
| 1.3.4.1 不同毛色绵羊皮肤组织的包埋及切片制作 | 第44-45页 |
| 1.3.4.2 不同毛色绵羊皮肤组织的免疫组织化学方法 | 第45-46页 |
| 1.3.4.3 不同毛色绵羊皮肤组织的免疫荧光方法 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-53页 |
| 2.1 不同毛色绵羊皮肤总RNA的提取及鉴定 | 第47-49页 |
| 2.1.1 总RNA的检测结果 | 第47页 |
| 2.1.2 普通PCR扩增产物电泳结果 | 第47-48页 |
| 2.1.3 PCR扩增产物的测序结果 | 第48-49页 |
| 2.1.4 实时荧光定量PCR | 第49页 |
| 2.1.4.1 Gnαs和Gnα11在mRNA水平的表达扩增曲线结果 | 第49页 |
| 2.1.4.2 Gnαs和Gnα11在mRNA水平的表达熔解曲线结果 | 第49页 |
| 2.2 Gnαs和Gnα11 mRNA在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第49-50页 |
| 2.3 Gnαs和Gnα11蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第50-51页 |
| 2.3.1 不同毛色绵羊皮肤总蛋白的提取及考马斯亮蓝的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3.2 Western blot检测不同毛色绵羊皮肤中Gnαs和Gnα11蛋白的表达量 | 第51页 |
| 2.4 Gnαs和Gnα11蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的定位分析 | 第51-53页 |
| 2.4.1 免疫组织化学检测Gnαs和Gnα11蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的表达定位 | 第51-53页 |
| 2.4.2 免疫荧光检测Gnαs和Gnα11蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的表达定位 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| 第三章 基于iTRAQ技术在不同毛色绵羊皮肤中差异蛋白的筛选 | 第57-69页 |
| 1 试验材料与方法 | 第57-62页 |
| 1.1 试验动物及样品采集 | 第57页 |
| 1.2 试验试剂、耗材及仪器 | 第57-59页 |
| 1.2.1 试验试剂 | 第57-59页 |
| 1.2.2 试验耗材 | 第59页 |
| 1.2.3 试验仪器 | 第59页 |
| 1.3 试验方法 | 第59-62页 |
| 1.3.1 iTRAQ技术路线 | 第59-60页 |
| 1.3.2 绵羊皮肤组织总蛋白的提取及质量鉴定 | 第60页 |
| 1.3.2.1 绵羊皮肤组织总蛋白的提取 | 第60页 |
| 1.3.2.2 绵羊皮肤组织总蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第60页 |
| 1.3.3 酶解和肽段定量 | 第60-61页 |
| 1.3.4 肽段标记 | 第61页 |
| 1.3.5 SCX分级 | 第61页 |
| 1.3.6 质谱分析 | 第61页 |
| 1.3.6.1 毛细管高效液相色谱 | 第61页 |
| 1.3.6.2 质谱鉴定 | 第61页 |
| 1.3.7 数据分析 | 第61-62页 |
| 1.3.7.1 数据库 | 第61-62页 |
| 1.3.7.2 Mascot搜索 | 第62页 |
| 1.3.7.3 定量分析 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-66页 |
| 2.1 不同毛色绵羊皮肤组织中总蛋白的提取 | 第62-63页 |
| 2.1.1 蛋白样品浓度的检测结果 | 第62页 |
| 2.1.2 SDS-PAGE电泳检测结果 | 第62-63页 |
| 2.2 iTRAQ(LC-MS/MS)检测分析结果 | 第63-66页 |
| 2.2.1 酶解肽段定量结果 | 第63页 |
| 2.2.2 肽段SCX检测分级结果 | 第63-64页 |
| 2.2.3 LC MS/MS检测结果 | 第64-66页 |
| 2.2.3.1 定量统计 | 第64页 |
| 2.2.3.2 显著性差异蛋白质 | 第64页 |
| 2.2.3.3 定量比值直方分布分析 | 第64-65页 |
| 2.2.3.4 重复标记相关性分析 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 4 小结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| 第四章 不同毛色绵羊皮肤组织蛋白组数据的生物信息学分析 | 第69-81页 |
| 1 材料和方法 | 第69-71页 |
| 1.1 原始数据的获取和处理 | 第69-70页 |
| 1.2 Gene Ontology(GO)功能注释 | 第70-71页 |
| 1.2.1 序列比对(BLAST) | 第70页 |
| 1.2.2 GO功能条目提取(Mapping) | 第70页 |
| 1.2.3 功能注释(Annotation) | 第70页 |
| 1.2.4 补充注释(Annotation augmentation) | 第70页 |
| 1.2.5 GO功能注释统计 | 第70页 |
| 1.2.6 GOSlim注释与统计 | 第70-71页 |
| 1.3 KEGG通路注释 | 第71页 |
| 1.4 蛋白互作网络分析 | 第71页 |
| 2 结果与分析 | 第71-77页 |
| 2.1 不同毛色绵羊皮肤组织蛋白定量结果分析 | 第71页 |
| 2.2 Gene Ontology(GO)功能注释分析 | 第71-75页 |
| 2.2.1 序列比对(BLAST)统计分析 | 第71-72页 |
| 2.2.2 GO功能条目提取(Mapping) | 第72页 |
| 2.2.3 功能注释(Annotation) | 第72-73页 |
| 2.2.4 补充注释(Annotation augmentation) | 第73页 |
| 2.2.5 GO功能注释统计 | 第73-75页 |
| 2.3 KEGG通路注释结果 | 第75-76页 |
| 2.4 蛋白质互作网络图 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| 4 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| 第五章 血管紧张素Ⅱ在不同毛色绵羊皮肤中的表达差异 | 第81-91页 |
| 1 试验材料与方法 | 第81-82页 |
| 1.1 试验试剂、耗材及仪器 | 第81页 |
| 1.2 试验方法 | 第81-82页 |
| 1.2.1 Ang Ⅱ蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的LC-MS/MS鉴定 | 第81页 |
| 1.2.2 Western blot检测Ang Ⅱ蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第81页 |
| 1.2.3 Ang Ⅱ蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的定位分析 | 第81页 |
| 1.2.4 Ang ⅡmRNA在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第81-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-87页 |
| 2.1 Ang Ⅱ蛋白的LC-MS/MS鉴定结果 | 第82页 |
| 2.2 Western blot检测不同毛色绵羊皮肤中Ang Ⅱ蛋白的表达量 | 第82-83页 |
| 2.3 Ang Ⅱ蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的定位分析 | 第83-85页 |
| 2.4 Ang ⅡmRNA在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第85-87页 |
| 2.4.1 不同毛色绵羊皮肤总RNA的提取及鉴定结果 | 第85页 |
| 2.4.2 普通PCR扩增产物电泳结果 | 第85-86页 |
| 2.4.3 实时荧光定量PCR | 第86-87页 |
| 2.4.3.1 Ang ⅡmRNA水平的表达扩增曲线和熔解曲线结果 | 第86页 |
| 2.4.3.2 Ang ⅡmRNA在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第86-87页 |
| 3 讨论 | 第87-88页 |
| 4 小结 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-91页 |
| 第六章 对ACTB和FGA差异蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的验证分析 | 第91-104页 |
| 1 试验材料与方法 | 第91-93页 |
| 1.1 试验动物及样品采集 | 第91页 |
| 1.2 试验试剂、耗材及仪器 | 第91页 |
| 1.3 试验方法 | 第91-93页 |
| 1.3.1 ACTB和FGA蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的LC-MS/MS鉴定 | 第91-92页 |
| 1.3.2 Western blot检测ACTB和FGA蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第92页 |
| 1.3.3 激光共聚焦检测ACTB和FGA蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的表达定位分析 | 第92-93页 |
| 1.3.4 ACTB和FGA mRNA在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-99页 |
| 2.1 ACTB和FGA蛋白在不同毛色绵羊皮肤中LC-MS/MS的鉴定结果 | 第93-94页 |
| 2.2 Western blot检测ACTB和FGA蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第94-95页 |
| 2.3 激光共聚焦检测ACTB和FGA蛋白在不同毛色绵羊皮肤中的表达定位 | 第95-98页 |
| 2.4 QRT-PCT检测ACTB和FGA mRNA在不同毛色绵羊皮肤中的相对表达量 | 第98-99页 |
| 2.4.1 RT-PCR扩增产物电泳结果 | 第98页 |
| 2.4.2 QRT-PCR检测ACTB和FGA mRNA的相对表达量 | 第98-99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 4 小结 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-104页 |
| 全文总结 | 第104-105页 |
| 研究创新与展望 | 第105-107页 |
| Abstract | 第107-109页 |
| 附件1 蛋白质鉴定定量表 | 第111-146页 |
| 附件2 酪氨酸代谢通路图 | 第146-147页 |
| 附件3 氧化磷酸化通路图 | 第147-148页 |
| 附件4 血小板代谢通路图 | 第148-149页 |
| 中英文对照及缩写表 | 第149-151页 |
| 在读期间的主要科研成绩 | 第151-153页 |
| 致谢 | 第153-154页 |
