| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-20页 |
| 1 瘦素 | 第13-15页 |
| ·瘦素的发现 | 第13-14页 |
| ·瘦素的功能 | 第14-15页 |
| 2 leptin受体 | 第15-17页 |
| ·leptin受体的种类和作用 | 第15-16页 |
| ·鱼类LepR的结构 | 第16-17页 |
| 3 信号通路 | 第17-18页 |
| ·JAK/STAT信号通路 | 第17页 |
| ·IRS-PI3K信号通路 | 第17-18页 |
| 4 LepR的内化及二聚体化 | 第18-19页 |
| ·LepR的内化 | 第18-19页 |
| ·LepR的二聚体化 | 第19页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 第二部分 研究内容 | 第20-69页 |
| 第一章 鲫鱼leptin-b基因的克隆与原核表达 | 第20-44页 |
| 1 前言 | 第20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| ·材料 | 第20-24页 |
| ·方法 | 第24-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-42页 |
| ·鲫鱼肝脏总RNA的提取 | 第34页 |
| ·鲫鱼leptin-b基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·leptin-b完整编码区克隆及T载体构建 | 第35-36页 |
| ·鲫鱼leptin-b蛋白基本性质分析 | 第36-39页 |
| ·鲫鱼leptin-b基因系统进化树的构建 | 第39-40页 |
| ·原核表达载体pET32-leptin-b的构建 | 第40-41页 |
| ·pET32-leptin-b可溶性表达及纯化结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第二章 可溶性leptin受体与leptin的结合分析 | 第44-53页 |
| 1 前言 | 第44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-49页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-51页 |
| ·Trx-leptin-a和Trx-leptin-b的可溶性表达 | 第49-50页 |
| ·pull-down结果 | 第50页 |
| ·鲫鱼LepR抗体具有较强的特异性 | 第50页 |
| ·cclpr-S2能够与leptin结合 | 第50-51页 |
| ·cclpr-S2与leptin-a、leptin-b亲和力不同 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 leptin受体真核荧光蛋白载体的构建 | 第53-68页 |
| 1 前言 | 第53页 |
| 2 材料 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·溶液配制与处理 | 第53-54页 |
| 3 方法 | 第54-59页 |
| ·荧光蛋白载体的构建 | 第54-56页 |
| ·鲫鱼LepR真核荧光蛋白载体的构建 | 第56-59页 |
| 4 结果与分析 | 第59-66页 |
| ·荧光蛋白基因的扩增 | 第59-60页 |
| ·eYFP-T载体、eCFP-T载体菌液验证 | 第60-61页 |
| ·质粒提取 | 第61页 |
| ·质粒的Apa Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切 | 第61-62页 |
| ·pcDNA3.1-eYFP、pcDNA3.1-eCFP的菌液验证 | 第62-63页 |
| ·鲫鱼LepR基因的扩增 | 第63页 |
| ·cclpr-L-T载体、cclpr-S1-T载体菌液验证 | 第63-64页 |
| ·质粒提取 | 第64页 |
| ·质粒的Hind Ⅲ和Xho Ⅰ双酶切 | 第64-65页 |
| ·鲫鱼LepR真核荧光蛋白载体的菌液验证 | 第65-66页 |
| ·Hela细胞转染结果 | 第66页 |
| 5 讨论 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第77-79页 |
| 浙江师范大学学位论文诚信承诺书 | 第79页 |
