| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 植物细胞死亡 | 第11页 |
| 2 NO是植物中重要的信号分子 | 第11-19页 |
| ·NO的功能 | 第11-12页 |
| ·NO的合成途径 | 第12页 |
| ·NO对蛋白的翻译后修饰作用 | 第12-13页 |
| ·细胞内蛋白亚硝基化稳态平衡(Homeostasis)的调控 | 第13-14页 |
| ·亚硝基化在植物细胞死亡中的作用 | 第14-19页 |
| 3 本课题的研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 实验内容 | 第20-56页 |
| 1 材料与方法 | 第20-21页 |
| ·菌株、载体与材料 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-45页 |
| ·番茄Adi3、PDK1基因的克隆 | 第21-22页 |
| ·番茄RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·番茄cDNA的合成 | 第23-24页 |
| ·pMAL-C2E-Adi3、pMAL-C2E-PDK1表达载体的构建 | 第24页 |
| ·PCR扩增条件及电泳检测 | 第24-26页 |
| ·PCR混合物纯化 | 第26页 |
| ·PCR产物酶切和pMAL-C2E载体酶切 | 第26-27页 |
| ·PCR产物与pMAL-C2E连接 | 第27-28页 |
| ·制备克隆菌株E.coli DH5α(或BL21)的感受态细胞 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·阳性克隆筛选及测序 | 第29页 |
| ·质粒提取 | 第29-31页 |
| ·酶切验证 | 第31页 |
| ·pMAL-PDK1、pMAL-Adi3蛋白的表达和纯化 | 第31-34页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第34-35页 |
| ·蛋白浓度的测定方法 | 第35-37页 |
| ·亚硝基化靶蛋白鉴定 | 第37-39页 |
| ·半定量RT-PCR | 第39-40页 |
| ·激酶活性的分析 | 第40页 |
| ·GV2260感受态细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·烟草/本氏烟培养 | 第41-42页 |
| ·基因枪法 | 第42页 |
| ·烟草花叶病毒(TMV)侵染及检测 | 第42-43页 |
| ·亚细胞定位 | 第43-44页 |
| ·定点突变 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-56页 |
| ·沉默烟草GSNOR1导致自发性细胞死亡 | 第45-46页 |
| ·沉默番茄GSNOR1及Adi3导致自发性细胞死亡 | 第46-47页 |
| ·pMALC2E-Adi3和pMALC2E-PDK1的载体构建 | 第47-48页 |
| ·pMAL-Adi3及pMAL-PDK1的诱导表达及纯化 | 第48-50页 |
| ·亚硝基化修饰的鉴定 | 第50-51页 |
| ·GSNO和H_2O_2共促性抑制PDK1激酶活性 | 第51-52页 |
| ·GSNO对PDK1激酶活性的抑制可以被还原剂逆转 | 第52-53页 |
| ·PDK1的亚细胞定位 | 第53-54页 |
| ·PDK1体外定点突变 | 第54-56页 |
| 第三章 讨论与展望 | 第56-60页 |
| 1 在不同的植物中缺失GSNOR1会导致自发的细胞死亡 | 第56页 |
| 2 PDK1是亚硝基化的靶蛋白,NO和H_2O_2可协同抑制PDK1活性 | 第56-58页 |
| 3 在细胞死亡信号途径中NO和H_2O_2有多种靶蛋白? | 第58-59页 |
| 4 番茄PDK1亚硝基化位点突变对激酶活性的效应 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |
| 实验常用抗生素及药品母液配制方法 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第69-70页 |
| 浙江师范大学学位论文诚信承诺书 | 第70-71页 |
