肺炎克雷伯氏菌耐受碳青霉烯类药物的调控机制

【摘要】：为研究肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)耐受碳青霉烯类药物的调控机制,我们从外膜孔蛋白基因omp K35,omp K36以及编码碳青霉烯酶的beta-内酰胺酶基因KPC-2的作用入手来探讨耐药性的变化。主要过程和结果如下:1.通过对同样携带KPC-2基因的肺炎克雷伯氏菌的omp K35/K36基因测序,来检测这些菌株之间的耐药性差异是否和膜孔蛋白基因有关。结果发现了多种不同的omp K36序列型,临床分离菌株中造成细菌对于比阿培南(biapenem)耐药性的主要基因突变是omp K36基因上第134-135的甘氨酸-天门冬氨酸出现重复(GD重复)。2.通过实时PCR技术检测菌株KPM1026和其突变体KPM1027中omp K35和omp K36的表达量差异,我们发现在KPM1026中omp K35和omp K36的表达比KPM1027高。进一步实验表明,KPM1027中的孔蛋白基因正向调控因子ram R基因出现移码突变,从而导致omp K35基因的表达水平下降。3.从携带KPC-2基因的菌株KP1004和KP1008以及不携带KPC-2基因的菌株KPM1026和KPM1027中筛选耐受比阿培南或美罗培南突变体,对这些突变体进行omp K35/36基因的序列分析,检测美罗培南(meropenem)对于这些菌株的最低抑菌生长浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),结果表明孔蛋白基因的突变会使菌株的耐药性明显增加。4.选取不携带KPC-2基因的KPM1026和KPM1027及其得到的omp K36基因的突变体KPM1171和KPM1176作为受体菌,携带KPC-2基因的菌株作为供体菌,进行细菌接合实验。通过选择美罗培南耐药性将KPC基因导入受体菌株。结果表明,omp K36基因上的单一突变大大增加受体菌株对于碳青霉烯类药物的耐受性。5.将来自菌株KPM1026,KP1004和KP1064的omp K36基因克隆到表达载体p RX,将重组质粒转化菌株KP1074,通过检测对比阿培南的耐药性,进一步表明含有或不含有GD重复的omp K36基因序列类型对于该抗生素耐药性的效应。
【关键词】：肺炎克雷伯氏菌 孔蛋白 碳青霉烯
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R446.5