| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-21页 |
| ·环糊精概述 | 第14-15页 |
| ·环糊精的组成与结构 | 第14页 |
| ·环糊精的功能和应用 | 第14-15页 |
| ·环糊精的产生 | 第15页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶的概述 | 第15-16页 |
| ·CGTase的来源及应用 | 第15页 |
| ·CGTase的异源表达 | 第15-16页 |
| ·蛋白的定向进化技术 | 第16-20页 |
| ·理性进化 | 第16-17页 |
| ·非理性进化 | 第17-19页 |
| ·CGTase的分子改造 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 易错PCR技术提高环糊精葡萄糖基转移酶的可溶性表达 | 第21-37页 |
| 1 材料与方法 | 第21-28页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·试剂与仪器 | 第21-22页 |
| ·主要培养基 | 第22-23页 |
| ·常用洛液配制 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-28页 |
| ·分子实验操作方法 | 第24-25页 |
| ·易错PCR扩增与突变文库的构建 | 第25-26页 |
| ·突变文库的96孔快速筛选 | 第26-27页 |
| ·突变体的生产与纯化 | 第27页 |
| ·分析方法 | 第27-28页 |
| 2 结果分析 | 第28-36页 |
| ·易错PCR突变条件的确定 | 第28-29页 |
| ·突变文库的构建、筛选、鉴定 | 第29-30页 |
| ·突变体序列分析 | 第30-31页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶的诱导表达和分离纯化 | 第31-32页 |
| ·酶学性质分析 | 第32-34页 |
| ·酶的结构预测和突变位点分析 | 第34-36页 |
| 3 小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 Geobacillus sp.CHB1环糊精葡萄糖基转移酶淀粉结合位点N623饱和突变对催化效率与产物特异性的影响 | 第37-48页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第37-38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·突变体的构建 | 第38-39页 |
| ·突变体表达与纯化 | 第39页 |
| ·分析方法 | 第39页 |
| ·突变体的结构模拟 | 第39页 |
| ·CGT酶产物特异性分析 | 第39-40页 |
| 2 结果分析 | 第40-47页 |
| ·淀粉结合位点分析 | 第40-41页 |
| ·突变体的表达 | 第41-44页 |
| ·突变体最适反应温度和pH | 第44页 |
| ·突变体的动力学分析 | 第44-45页 |
| ·突变体的产物特异性 | 第45页 |
| ·反应动力学及作用机理分析 | 第45-47页 |
| 3 小结与讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 CBM_(bc251)与CGTase融合提高CGTase在CDs合成中对可溶性淀粉转化效率 | 第48-62页 |
| 1 材料与方法 | 第48-55页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·菌株与质粒 | 第48页 |
| ·仪器与试剂 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-55页 |
| ·分子生物学实验方法 | 第49页 |
| ·融合酶的理性设计 | 第49-54页 |
| ·融合酶的表达与纯化 | 第54页 |
| ·酶学性质分析 | 第54-55页 |
| ·酶反应动力学测定 | 第55页 |
| 2 结果分析 | 第55-60页 |
| ·融合酶的构建与表达、纯化 | 第55-56页 |
| ·融合酶的催化效率分析 | 第56页 |
| ·反应温度和pH对CDs合成的影响 | 第56-58页 |
| ·融合酶的反应动力学分析 | 第58-59页 |
| ·融合酶的模拟结构分析 | 第59-60页 |
| 3 小结与讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 分子伴侣共表达对环糊精葡萄糖基转移酶异源可溶性表达的影响 | 第62-73页 |
| 1 材料与方法 | 第62-65页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第62页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63-65页 |
| ·pET-28a(+)-ompA-cgt载体构建及鉴定 | 第63页 |
| ·CGTase的表达与表达条件优化 | 第63页 |
| ·分子伴侣共表达系统的构建和可溶性表达条件优化 | 第63-65页 |
| ·酶活测定、蛋白表达量测定 | 第65页 |
| 2 结果分析 | 第65-72页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-ompA-cgt的构建及鉴定 | 第65-66页 |
| ·CGTase的诱导表达及鉴定 | 第66页 |
| ·CGTase的表达纯化 | 第66-67页 |
| ·诱导温度的筛选 | 第67-68页 |
| ·分子伴侣与目的蛋白共表达 | 第68-70页 |
| ·诱导共表达条件优化 | 第70-72页 |
| ·温度对共表达的影响 | 第70-71页 |
| ·L-阿拉伯糖浓度对共表达的影响 | 第71-72页 |
| 3 小结与讨论 | 第72-73页 |
| 第六章 总结与展望 | 第73-75页 |
| 1 总结 | 第73-74页 |
| 2 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
