| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 研究背景 | 第11-45页 |
| ·p53 | 第11-28页 |
| ·p53基因的发现 | 第11页 |
| ·p53基因的结构 | 第11-13页 |
| ·p53蛋白发挥作用的分子机制 | 第13页 |
| ·p53蛋白的生物学活性 | 第13-20页 |
| ·p53的调控网络 | 第20-28页 |
| ·p53家族 | 第28页 |
| ·NLK | 第28-37页 |
| ·NLK基因的发现 | 第29页 |
| ·NLK基因的结构及分类 | 第29-30页 |
| ·NLK的功能 | 第30-35页 |
| ·NLK的调控网络 | 第35-37页 |
| ·DNA损伤修复 | 第37-40页 |
| ·TALEN敲除技术 | 第40-43页 |
| ·基因敲除技术简介 | 第40-41页 |
| ·TALEN技术原理 | 第41-43页 |
| ·USER(Uracil-Specific Excision Reagent)连接系统 | 第43-45页 |
| 2 实验材料和方法 | 第45-59页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·细胞及细胞培养所需材料 | 第45页 |
| ·DNA损伤实验所需材料 | 第45页 |
| ·载体构建所需材料 | 第45页 |
| ·荧光素酶报告基因实验所需材料 | 第45-46页 |
| ·免疫共沉淀和Western blotting实验所需材料 | 第46页 |
| ·GST pull-down实验所需材料 | 第46页 |
| ·生长曲线和克隆形成测定所需材料 | 第46页 |
| ·构建敲除细胞系所需材料 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-59页 |
| ·细胞培养和转染 | 第47-48页 |
| ·表达载体构建和质粒提取 | 第48-49页 |
| ·荧光素酶报告基因实验 | 第49页 |
| ·免疫共沉淀和Western blotting检测实验 | 第49-51页 |
| ·GST pull-down实验 | 第51-52页 |
| ·通过逆转录病毒载体构建瞬时或者稳定表达细胞系 | 第52-53页 |
| ·免疫荧光定位实验 | 第53页 |
| ·细胞克隆形成实验 | 第53页 |
| ·细胞生长曲线测定实验 | 第53-54页 |
| ·敲除细胞系的构建 | 第54-59页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第59-80页 |
| ·立项依据 | 第59-60页 |
| ·实验结果与分析 | 第60-76页 |
| ·NLK敲除细胞系的建立 | 第60-63页 |
| ·NLK敲除细胞拮抗DNA损伤 | 第63-64页 |
| ·NLK在DNA损伤信号通路中发挥作用 | 第64-65页 |
| ·NLK参与DNA损伤诱导p53蛋白激活的过程 | 第65-67页 |
| ·NLK影响p53的稳定性和活性 | 第67-69页 |
| ·NLK与p53相互作用 | 第69-72页 |
| ·NLK影响p53的泛素化降解途径 | 第72-74页 |
| ·NLK影响p53的乙酰化修饰 | 第74-75页 |
| ·NLK影响p53下游基因的表达 | 第75-76页 |
| ·实验讨论与展望 | 第76-80页 |
| 参考文献 | 第80-95页 |
| 缩略词表 | 第95-97页 |
| 作者简介 | 第97-98页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
