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桃蔗糖转运蛋白基因的克隆与原核表达

致谢第1-8页
摘要第8-10页
缩写表第10-12页
1 文献综述第12-20页
   ·植物源和库的关系第12页
   ·植物体内糖的运输第12页
   ·植物中的糖转运蛋白第12页
   ·桃蔗糖转运蛋白研究目的与意义第12-13页
   ·植物 SUT 基因的克隆第13-14页
   ·SUTs 的结构和分类第14-15页
     ·SUTs 的结构第14-15页
     ·SUTs 的分类第15页
   ·SUTs 的表达定位和功能等方面的研究第15-18页
     ·参与蔗糖/质子耦联的装载和卸载第15-16页
     ·参与蔗糖的贮藏第16页
     ·参与不同库组织的蔗糖供给第16-17页
     ·参与信号转导第17页
     ·参与蛋白互作第17-18页
     ·参与一些特定的生理过程第18页
   ·蔗糖转运蛋白表达的调控因素第18页
   ·实时荧光定量 PCR 技术的应用第18-19页
   ·研究植物基因功能的策略和方法第19-20页
2 引言第20-22页
3 材料与方法第22-32页
   ·试验材料第22-25页
     ·供试材料第22-23页
       ·营养器官第22页
       ·生殖器官第22-23页
       ·硒处理材料第23页
       ·蔗糖含量的测定第23页
     ·供试仪器第23页
     ·主要药品和试剂第23页
     ·菌株与载体第23页
     ·培养基的配制第23页
     ·SDS-PAGE 电泳所用试剂及配制第23-25页
   ·试验方法第25-32页
     ·桃不同组织总 RNA 的提取第25-26页
       ·桃叶片总 RNA 的提取第25页
       ·桃果实总 RNA 的提取第25-26页
       ·桃枝条韧皮部、萼片、雌蕊、雄蕊总 RNA 的提取第26页
     ·RNA 的纯度与浓度检测第26页
     ·RNA 的完整性检测第26页
     ·cDNA 第一条链的合成第26-27页
     ·桃 SUT 基因的克隆第27-30页
       ·目的片段的 PCR 扩增第27-28页
       ·PCR 扩增产物的检测和回收纯化第28页
       ·回收产物与 pMD18-T 载体的连接第28页
       ·大肠杆菌感受态细胞制备第28-29页
       ·含目的片段的连接产物对大肠杆菌的转化第29页
       ·菌液 PCR 鉴定第29页
       ·重组质粒的保存第29页
       ·重组质粒的提取第29-30页
     ·SUT 基因序列分析第30页
     ·SUT 基因组织特异性表达分析第30-31页
     ·成熟期 PpSUT1 基因富硒应答表达分析第31页
     ·桃 PpSUT1 原核表达载体的构建第31页
       ·目的片段与表达载体 pMAL-c2x 的酶切回收第31页
       ·目的片段与表达载体的连接第31页
     ·重组质粒 pMAL-c2x –PpSUT1 的表达第31-32页
4 结果与分析第32-46页
   ·桃不同组织总 RNA 的提取第32页
   ·内参基因的检测第32-33页
   ·桃 SUT1 基因克隆及序列分析第33-39页
     ·同源性分析第36-38页
     ·PpSUT1 编码氨基酸的跨膜结构分析第38-39页
   ·桃果实中蔗糖含量的变化第39页
   ·PpSUT1 基因的时空表达分析第39-42页
   ·PpSUT1 基因的亚硒酸钠应答分析第42页
   ·原核表达第42-46页
     ·桃 pMAL-c2x-PpSUT1 原核表达载体的构建第42-44页
     ·融合蛋白的诱导表达第44-46页
5 讨论第46-48页
   ·桃的 RNA 提取第46页
   ·SUT 基因的克隆第46页
   ·SUT 基因的序列分析第46-47页
   ·SUT 基因的时空表达第47页
   ·pMAL-c2x-PpSUT1 原核表达第47-48页
6 结论第48-50页
参考文献第50-60页
Abstract第60-61页

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