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米曲霉木聚糖酶氨基端β折叠股之间相互作用对该酶热稳定性影响的研究

摘要第1-4页
Abstract第4-6页
目录第6-9页
第一章 绪论第9-19页
   ·木聚糖概述第9页
   ·木聚糖酶第9-10页
     ·木聚糖酶简介第9-10页
     ·木聚糖酶的催化机理第10页
     ·木聚糖酶的分类第10页
   ·木聚糖酶的研究进展第10-15页
     ·11家族木聚糖酶的主要结构特征第10-11页
     ·11家族木聚糖酶的酶学性质第11-12页
     ·11家族木聚糖酶的热稳定性研究第12-15页
   ·木聚糖酶的应用第15-17页
     ·造纸工业第15页
     ·饲料工业第15-16页
     ·纺织工业第16页
     ·食品工业第16页
     ·木聚糖酶降解产物的应用第16-17页
     ·能源工业第17页
   ·本课题立题意义与研究内容第17-19页
     ·立题意义第17-18页
     ·研究内容第18-19页
第二章 材料与方法第19-34页
   ·实验材料第19-22页
     ·菌种与载体第19页
     ·工具酶与试剂第19页
     ·主要仪器设备第19-20页
     ·主要软件和网站第20页
     ·PCR引物第20页
     ·培养基第20-21页
     ·常用溶液的配置第21-22页
   ·AoXyn11A氨基端引入氢键和二硫键的实验方法第22-32页
     ·氨基酸序列的比对和分析第22-23页
     ·同源建模和分子动力学模拟第23页
     ·突变酶基因的构建第23-25页
     ·感受态 E. coli JM109 的制备第25页
     ·重组克隆质粒的连接与转化第25-26页
     ·重组子的鉴定筛选和保存测序第26页
     ·碱法提取质粒第26-27页
     ·重组质粒的双酶切第27页
     ·重组质粒的连接、转化、筛选和鉴定第27-28页
     ·重组表达质粒线性化和纯化回收第28-29页
     ·感受态 P. pastoris GS115 的制备第29页
     ·电击转化感受态 P. pastoris GS115 酵母第29-30页
     ·重组酵母的筛选和诱导表达第30页
     ·诱导表达产物分析鉴定第30-31页
     ·酶学性质分析第31-32页
   ·AoXyn11A氨基端引入咪唑环的实验方法第32-34页
     ·氨基酸序列的比对和分析第32页
     ·突变酶基因 AoXyn11AN9H序列的构建第32-33页
     ·构建重组克隆质粒pUCm-T-AoXyn11AN9H第33页
     ·构建重组表达质粒pPIC9K-AoXyn11AN9H第33页
     ·对 P. pastoris GS115 的转化、筛选和诱导表达第33页
     ·诱导表达产物的鉴定与分析第33页
     ·酶学性质分析第33-34页
第三章 结果与讨论第34-50页
   ·氢键和二硫键对AoXyn11A热稳定性的影响第34-43页
     ·氨基酸序列比对、同源建模和动力学模拟第34-35页
     ·突变木聚糖酶基因的扩增第35-36页
     ·重组克隆质粒的构建第36-37页
     ·重组表达质粒的构建第37-38页
     ·诱导表达产物鉴定第38-39页
     ·酶学性质鉴定第39-41页
     ·突变对酶三维结构和热稳定性的影响第41-43页
     ·进一步的推论第43页
   ·组氨酸对AoXyn11A热稳定性的影响第43-50页
     ·氨基酸序列比对和同源建模第43-44页
     ·杂合木聚糖酶基因的构建第44-45页
     ·构建重组克隆质粒第45页
     ·构建重组表达质粒第45页
     ·对 P. pastoris GS115 的转化、筛选和诱导表达第45-46页
     ·诱导表达产物鉴定第46-47页
     ·酶学性质鉴定第47-49页
     ·突变对酶热稳定性的影响第49-50页
主要结论与展望第50-52页
 主要结论第50页
 展望第50-52页
致谢第52-53页
参考文献第53-57页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第57页

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