高产共轭亚油酸的菌种诱变选育及酶学特性研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-25页 |
| ·共轭亚油酸的结构与功能 | 第13-14页 |
| ·共轭亚油酸的来源 | 第14-16页 |
| ·化学合成 | 第14页 |
| ·生物合成 | 第14-16页 |
| ·双歧杆菌 | 第14-15页 |
| ·乳酸杆菌 | 第15页 |
| ·丙酸杆菌 | 第15-16页 |
| ·亚油酸对菌体生长的抑制作用 | 第16页 |
| ·共轭亚油酸的分析检测 | 第16-18页 |
| ·紫外检测法(UV) | 第16-17页 |
| ·气相色谱法(GC) | 第17页 |
| ·高效液相色谱法 | 第17-18页 |
| ·气-质联用(GC-MS) | 第18页 |
| ·微生物离子注入诱变技术 | 第18-19页 |
| ·亚油酸异构酶的研究进展 | 第19-23页 |
| ·亚油酸异构酶的分布 | 第19页 |
| ·亚油酸异构酶的分离纯化 | 第19-20页 |
| ·亚油酸异构酶的性质 | 第20-22页 |
| ·底物与产物的专一性 | 第20-21页 |
| ·最佳反应温度 | 第21-22页 |
| ·最佳反应pH值 | 第22页 |
| ·其它因素对酶活的影响 | 第22页 |
| ·亚油酸异构酶作用机理 | 第22-23页 |
| ·选题的内容及意义 | 第23-25页 |
| ·选题的意义 | 第23页 |
| ·研究内容 | 第23-25页 |
| 第2章 共轭亚油酸高产菌株的筛选 | 第25-40页 |
| ·材料与方法 | 第25-28页 |
| ·材料与试剂 | 第25-26页 |
| ·仪器与设备 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-28页 |
| ·菌种分离 | 第26页 |
| ·发酵方法 | 第26页 |
| ·待测样品的提取 | 第26-27页 |
| ·CLA的检测方法 | 第27页 |
| ·CLA含量标准曲线的绘制 | 第27页 |
| ·紫外分光光度计检测 | 第27页 |
| ·高效液相色谱Ag~+-HPLC检测 | 第27页 |
| ·16s rDNA菌种鉴定 | 第27-28页 |
| ·菌株基因组DNA提取 | 第27页 |
| ·PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·CLA高产菌株的生理学特性研究 | 第28页 |
| ·培养温度对CLA产量的影响 | 第28页 |
| ·培养时间对CLA产量的影响 | 第28页 |
| ·亚油酸添加量对CLA产量的影响 | 第28页 |
| ·接种量对CLA产量的影响 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-38页 |
| ·产CLA菌株的筛选 | 第28-31页 |
| ·CLA紫外吸收标准曲线 | 第28-29页 |
| ·菌株筛选 | 第29-31页 |
| ·Ag~+-HPLC检测生成的CLA | 第31页 |
| ·菌种鉴定 | 第31-33页 |
| ·菌株的菌落和形态特征 | 第31-32页 |
| ·16s rDNA菌种鉴定 | 第32页 |
| ·菌株16s rDNA序列测定及比对 | 第32-33页 |
| ·诱变高产菌株培养条件的优化 | 第33-38页 |
| ·最佳培养温度的确定 | 第33-34页 |
| ·最佳培养时间的确定 | 第34-35页 |
| ·LA添加量对CLA产量的影响 | 第35-37页 |
| ·接种量对CLA产量的影响 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·结论 | 第38-40页 |
| 第3章 N~+精确定位选育高产CLA乳酸菌 | 第40-53页 |
| ·材料与方法 | 第40-44页 |
| ·菌种 | 第40-41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·仪器设备 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·菌株活化 | 第41页 |
| ·高产菌种的诱变选育 | 第41-42页 |
| ·菌种生长曲线的测定与绘制 | 第41页 |
| ·铯137-γ射线辐照诱变 | 第41-42页 |
| ·N离子束诱变选育 | 第42页 |
| ·菌膜的制备 | 第42页 |
| ·N离子束诱变条件 | 第42页 |
| ·存活率和突变率的计数 | 第42页 |
| ·菌株计数和发酵方法 | 第42-43页 |
| ·菌种计数 | 第42-43页 |
| ·发酵方法 | 第43页 |
| ·CLA的提取与检测 | 第43-44页 |
| ·CLA的提取 | 第43页 |
| ·CLA的含量测定 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-51页 |
| ·铯137-γ射线辐照诱变 | 第44-46页 |
| ·辐照剂量的选择 | 第44页 |
| ·诱变菌株发酵情况 | 第44-46页 |
| ·高产突变菌株产CLA的稳定性 | 第46页 |
| ·离子束注入诱变 | 第46-51页 |
| ·离子注入剂量对菌体存活率的影响 | 第46-48页 |
| ·离子注入剂量对菌株突变率的影响 | 第48-50页 |
| ·高产突变菌株产CLA的稳定性 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第4章 亚油酸异构酶的分离与纯化 | 第53-66页 |
| ·材料与方法 | 第53-58页 |
| ·菌种 | 第53页 |
| ·主要仪器与设备 | 第53-54页 |
| ·试剂与填料 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·菌种的活化 | 第54页 |
| ·产酶诱导培养 | 第54页 |
| ·菌体收集 | 第54页 |
| ·饱和硫酸铵分段盐析 | 第54-55页 |
| ·酶液的透析与浓缩 | 第55页 |
| ·葡聚糖凝胶G-100层析 | 第55-56页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第56页 |
| ·酶活的测定 | 第56页 |
| ·酶活相应计算方法 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第56-57页 |
| ·亚油酸异构酶理化性质的研究 | 第57-58页 |
| ·温度对亚油酸异构酶活性的影响 | 第57页 |
| ·反应时间对亚油酸异构酶活力的影响 | 第57页 |
| ·pH值对亚油酸异构酶的影响 | 第57页 |
| ·微氧条件对亚油酸异构酶活力的影响 | 第57-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-64页 |
| ·蛋白质标准曲线的绘制 | 第58页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第58-59页 |
| ·葡聚糖凝胶G-100过滤层析 | 第59-60页 |
| ·分离纯化后酶活力的变化 | 第60-61页 |
| ·亚油酸异构酶分子量测定 | 第61页 |
| ·亚油酸异构酶的酶学性质 | 第61-64页 |
| ·亚油酸异构酶对温度的耐受性 | 第61-62页 |
| ·反应时间对亚油酸异构酶活力的影响 | 第62-63页 |
| ·pH值对亚油酸异构酶活力的影响 | 第63-64页 |
| ·微氧条件对亚油酸异构酶活力的影响 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 第5章 全文结论 | 第66-68页 |
| ·主要结论 | 第66-67页 |
| ·创新点 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 发表论文情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
