| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一部分 肺炎链球菌O-GlcNAc糖基转移酶GtfA及其激活子GtfB的结构及功能研究 | 第13-77页 |
| 第一章 O-GlcNAc糖基转移酶研究背景 | 第13-27页 |
| ·引言 | 第13-17页 |
| ·肺炎链球菌PsrP蛋白及其生物合成通路的研究进展 | 第17-19页 |
| ·糖基转移酶的分类及反应机制概述 | 第19-27页 |
| ·糖基转移酶概述 | 第19-20页 |
| ·糖基转移酶的反应机制 | 第20-22页 |
| ·蛋白质糖基化的修饰类型 | 第22-23页 |
| ·O-GlcNAc糖基转移酶的研究进展 | 第23-27页 |
| 第二章 实验材料、设备及研究方法 | 第27-39页 |
| ·实验材料及设备型号 | 第27-28页 |
| ·菌株和载体 | 第27页 |
| ·常用的工具酶和试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-39页 |
| ·基因克隆和重组质粒构建 | 第28-30页 |
| ·蛋白的大量表达和分离纯化 | 第30页 |
| ·GtfA,GtfB及其各个版本克隆的蛋白表达和分离纯化 | 第30页 |
| ·PsrP-SRR1及各个截短版的蛋白表达和分离纯化 | 第30页 |
| ·蛋白质间相互作用研究 | 第30-31页 |
| ·GtfA和GtfB相互作用检测 | 第30-31页 |
| ·GtfA-GtfB与受体蛋白的相互作用检测 | 第31页 |
| ·晶体生长和优化以及衍射数据收集 | 第31-33页 |
| ·晶体结构解析及精修 | 第33-34页 |
| ·糖基转移酶酶学参数测定 | 第34页 |
| ·体外糖基化检测及糖基化位点鉴定 | 第34-36页 |
| ·定位最适的受体肽长度,并将GtfA与受体肽进行分子对接 | 第36页 |
| ·体内糖基化检测及蛋白相互作用检测 | 第36-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-65页 |
| ·GtfA,GtfB及复合物蛋白制备和晶体学研究 | 第39-42页 |
| ·GtfA,GtfB及复合物蛋白的表达与纯化 | 第39页 |
| ·GtfA和GtfB蛋白质相互作用研究 | 第39-40页 |
| ·GtfA,GtfB及复合物蛋白的晶体学研究 | 第40-42页 |
| ·GtfA的晶体结构与活性位点分析 | 第42-53页 |
| ·GtfA的整体结构 | 第42-45页 |
| ·GtfA活性位点 | 第45-46页 |
| ·GtfA结构的分析 | 第46-53页 |
| ·GtfA核心结构具有经典的GT-B折叠类型 | 第46-47页 |
| ·DUF1975的β-meander结构是一种新的折叠类型 | 第47-48页 |
| ·GtfA是一种新型结构模式的糖基转移酶 | 第48-52页 |
| ·GtfA可能采用Retaining反应机制 | 第52-53页 |
| ·基于结构的功能研究 | 第53-60页 |
| ·糖基转移酶酶学参数测定 | 第53-54页 |
| ·体外O-GlcNAcylation活性鉴定 | 第54-56页 |
| ·GtfA-GtfB是一类新型的具有多位点修饰能力的OGT | 第56-57页 |
| ·O-GlcNAcylation过程中蛋白相互作用研究 | 第57-60页 |
| ·GtfA与受体蛋白的相互作用及糖基化反应机制研究 | 第60-65页 |
| ·GtfA与受体蛋白的分子对接模型 | 第60-63页 |
| ·体外和体内O-GlcNAcylation修饰活性验证 | 第63-65页 |
| 小结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 第二部分 几组重要的ABC-transporter的结构和功能研究 | 第77-113页 |
| 第四章 铁获取ABC转运体研究背景 | 第79-85页 |
| ·铁摄取与细菌的致病性紧密相关 | 第79-81页 |
| ·铁摄取对肺炎链球菌的影响 | 第81-83页 |
| ·PiuA蛋白是肺炎链球菌的关键致病因子和重要疫苗候选 | 第83-85页 |
| 第五章 实验材料和方法 | 第85-89页 |
| ·PiuABC-transporter系统中基因克隆、表达和蛋白质纯化 | 第85-86页 |
| ·PiuAAN37晶体初筛,优化及数据收集 | 第86-87页 |
| ·PiuAAN37晶体结构解析和精修 | 第87页 |
| ·PiuAAN37与底物的相互作用检测 | 第87-88页 |
| ·PiuAAN37与hIgG的相互作用检测及抗体优化 | 第88-89页 |
| 第六章 实验结果和讨论 | 第89-99页 |
| ·蛋白纯化及晶体初筛 | 第89-90页 |
| ·PiuAAN37的整体结构 | 第90-92页 |
| ·PiuAAN37的底物结合口袋 | 第92-94页 |
| ·PiuA具有利用多种铁源的能力 | 第94-96页 |
| ·PiuA与抗体的相互作用研究 | 第96-99页 |
| 小结 | 第99-101页 |
| 博士期间参与的其他工作 | 第101-107页 |
| 参考文献 | 第107-113页 |
| 附录 | 第113-129页 |
| 致谢 | 第129-131页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第131页 |
