| 缩写词 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-24页 |
| 1 植物种质资源离体保存研究进展 | 第15-19页 |
| ·植物种质资源的缓慢生长保存 | 第15-18页 |
| ·降低保存环境温度 | 第16页 |
| ·调节培养环境光照条件 | 第16-17页 |
| ·调节培养基渗透压和添加生长调节剂 | 第17页 |
| ·调整培养环境的气相条件 | 第17页 |
| ·调整培养基组分 | 第17-18页 |
| ·其他方法 | 第18页 |
| ·植物种质资源的超低温保存 | 第18-19页 |
| ·植物种质资源离体保存存在问题 | 第19页 |
| 2 柑橘类植物种质资源离体保存研究进展 | 第19-21页 |
| ·组织培养法保存 | 第19-20页 |
| ·试管苗保存 | 第19-20页 |
| ·愈伤组织的保存 | 第20页 |
| ·超低温保存 | 第20-21页 |
| ·柑橘类植物试管苗再生体系研究 | 第21页 |
| 3 植物 MLP2 基因的研究进展 | 第21-22页 |
| ·MLP 结构与功能 | 第21-22页 |
| ·MLP2 基因克隆与表达研究 | 第22页 |
| 4 植物基因转化烟草的研究 | 第22-23页 |
| 5 本研究的目的意义和主要研究内容 | 第23-24页 |
| ·本研究的意义 | 第23页 |
| ·本研究的主要内容 | 第23-24页 |
| 第二章 尤溪金柑再生体系的建立与优化 | 第24-36页 |
| 1 试验材料和方法 | 第24-26页 |
| ·试验材料 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-26页 |
| ·无菌体系建立 | 第24页 |
| ·KT 对尤溪金柑试管苗增殖的影响 | 第24-25页 |
| ·NAA 和 KT 对芽增殖的影响 | 第25页 |
| ·BA 和 NAA 对芽增殖的影响 | 第25页 |
| ·NAA 和 IBA 对试管苗生根的影响 | 第25-26页 |
| ·数据处理与分析 | 第26页 |
| 2 结果分析 | 第26-35页 |
| ·KT 对尤溪金柑芽增殖的影响 | 第26-27页 |
| ·NAA 和 KT 对尤溪金柑芽增殖的影响 | 第27-29页 |
| ·BA 和 NAA 对尤溪金柑芽增殖的影响 | 第29-31页 |
| ·不同处理对尤溪金柑生根的影响 | 第31-35页 |
| ·不同处理对尤溪金柑生根率的影响 | 第31-33页 |
| ·不同处理对尤溪金柑生根数的影响 | 第33-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 尤溪金柑等柑橘类植物种质资源的离体保存研究 | 第36-52页 |
| 第一节 尤溪金柑种质资源离体保存条件的探讨与优化 | 第36-46页 |
| 1 材料方法 | 第36-37页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·不同容器对尤溪金柑离体种质保存的影响 | 第37页 |
| ·培养基中 CaCl_2浓度对尤溪金柑离体种质保存的影响 | 第37页 |
| ·不同处理对尤溪金柑离体种质保存的影响 | 第37页 |
| 2 结果分析 | 第37-45页 |
| ·不同容器对尤溪金柑试管苗缓慢生长保存的影响 | 第37-39页 |
| ·CaCl_2对尤溪金柑试管苗缓慢生长保存的影响 | 第39-40页 |
| ·CaCl_2、甘露醇和 PP333对尤溪金柑试管苗缓慢生长保存的影响 | 第40-45页 |
| ·保存 6 个月后存活率 | 第40-42页 |
| ·保存 12 个月后存活率 | 第42-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| ·低浓度的 CaCl_2和小容积的培养容器有利于尤溪金柑试管苗的中长期保存 | 第45-46页 |
| ·培养基中添加适当浓度的 CaCl_2和 PP333可提高尤溪金柑试管苗存活率 | 第46页 |
| 第二节 92 份柑橘种质资源试管苗离体保存与生长状态观察 | 第46-52页 |
| 1 材料与方法 | 第47页 |
| 2 结果分析 | 第47-50页 |
| ·原有的 67 份柑橘种质资源生长状态观察 | 第47页 |
| ·25 份新收集柑橘种质资源 | 第47-48页 |
| ·25 份柑橘种质资源的观察 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| ·不同基因型的柑橘种质资源试管苗生长状态不同 | 第50页 |
| ·试管苗离体保存柑橘种质资源优势明显 | 第50-52页 |
| 第四章 尤溪金柑试管苗 Fc-MLP2 基因的克隆 | 第52-65页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因保守区的克隆 | 第53页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因 3’RACE | 第53页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因 5’RACE | 第53-54页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因全长的拼接及 ORF 验证 | 第54页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 生物信息学分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-63页 |
| ·尤溪金柑试管苗叶片总 RNA 的提取 | 第54-55页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因全长的克隆 | 第55-56页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因保守区克隆 | 第55页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因 3′RACE | 第55页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因 5′RACE | 第55-56页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 基因全长拼接与 ORF 验证 | 第56页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 序列的生物信息学分析 | 第56-63页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 序列理化性质及亲疏水性预测分析 | 第56-57页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 的信号肽和亚细胞定位预测分析 | 第57-58页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 跨膜结构预测分析 | 第58-59页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 磷酸化位点、功能位点和保守结构域的预测分析 | 第59-60页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 二级结构、三级结构和卷曲螺旋的预测分析 | 第60-62页 |
| ·尤溪金柑 Fc-MLP2 氨基酸序列分析及系统进化树的构建 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 Fc-MLP2 基因的荧光定量 PCR 分析 | 第65-72页 |
| 1 材料和方法 | 第65-67页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·试剂与仪器 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-67页 |
| ·尤溪金柑不同保存时期试管苗材料的获得 | 第65页 |
| ·总 RNA 的提取及质量鉴定 | 第65-66页 |
| ·cDNA 合成 | 第66页 |
| ·Fc-MLP2 基因的实时荧光定量 PCR | 第66-67页 |
| 2 结果分析 | 第67-70页 |
| ·尤溪金柑不同保存时期材料的总 RNA 的提取及质量鉴定 | 第67页 |
| ·标准曲线建立 | 第67-68页 |
| ·内参基因 18S rRNA 和目的基因 Fc-MLP2 的特异性扩增 | 第68-69页 |
| ·尤溪金柑不同保存时期 Fc-MLP2 基因的相对定量表达分析 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| ·Fc-MLP2 基因与尤溪金柑保存状态有关 | 第70-71页 |
| ·Fc-MLP2 基因在尤溪金柑保存中的作用 | 第71-72页 |
| 第六章 Fc-MLP2 基因转化烟草与功能鉴定研究 | 第72-84页 |
| 1 材料与方法 | 第72-74页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·植物材料及所用菌株和质粒 | 第72页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72页 |
| ·PCR 引物 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-74页 |
| ·载体构建及农杆菌的培养 | 第73页 |
| ·根癌农杆菌转化烟草叶片 | 第73页 |
| ·转基因植株的检测 | 第73-74页 |
| ·低温对转基因烟草 Fc-MLP2 基因表达的影响 | 第74页 |
| ·机械损伤对转基因烟草 Fc-MLP2 基因表达的影响 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-82页 |
| ·载体构建及重组子鉴定 | 第74-75页 |
| ·转基因植株检测 | 第75-77页 |
| ·转基因植株的 DNA 水平检测 | 第75-76页 |
| ·转基因植株的 GUS 检测 | 第76-77页 |
| ·RNA 转录水平检测 | 第77页 |
| ·转基因烟草定量表达分析 | 第77-82页 |
| ·标准曲线建立 | 第77页 |
| ·低温对转基因烟草 Fc-MLP2 基因表达的影响 | 第77-80页 |
| ·机械损伤对转基因烟草 Fc-MLP2 基因表达的影响 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| ·pCAMBIA1301- Fc-MLP2 载体的优点 | 第82页 |
| ·低温处理下转基因烟草中 Fc-MLP2 基因的相对表达量降低 | 第82-83页 |
| ·Fc-MLP2 基因在植物抵御机械伤害上有一定作用 | 第83-84页 |
| 第七章 小结 | 第84-87页 |
| 1 尤溪金柑再生体系建立及优化 | 第84页 |
| 2 尤溪金柑等柑橘类植物种质资源保存 | 第84-85页 |
| ·尤溪金柑种质资源离体保存条件的探讨与优化 | 第84页 |
| ·25 份柑橘种质资源保存体系建立与生长状态观察 | 第84-85页 |
| 3 Fc-MLP2 基因的克隆与生物信息学分析 | 第85页 |
| 4 尤溪金柑种质资源保存过程中 Fc-MLP2 基因的定量表达 | 第85-86页 |
| 5 Fc-MLP2 基因转化烟草的研究 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 附录 | 第95-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
