| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-17页 |
| 1 文献综述 | 第10-15页 |
| ·维生素 E | 第10-14页 |
| ·维生素 E 的结构特征 | 第10-11页 |
| ·维生素的 E 自然分布 | 第11页 |
| ·维生素 E 的发现 | 第11页 |
| ·维生素 E 的莽草酸合成途径 | 第11-12页 |
| ·维生素 E 的生理功能 | 第12-13页 |
| ·莽草酸途径维生素 E 合成的关键酶——预苯丙酸脱氢酶 | 第13-14页 |
| ·抗除草剂新型靶位点——HPPD | 第14-15页 |
| 2 目的和意义 | 第15-16页 |
| 3 技术路线 | 第16-17页 |
| 第一章 基因克隆 | 第17-35页 |
| 1 实验材料 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·载体和菌种 | 第17页 |
| ·试验器具和耗材 | 第17-18页 |
| ·仪器与设备 | 第18页 |
| 2 试验方法 | 第18-27页 |
| ·小拟南芥 DNA 的提取 | 第18-19页 |
| ·酿酒酵母 INVSC1 总 RNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第20-21页 |
| ·酿酒酵母 PDH 基因和小拟南芥 HPPD 基因片段的 DNA 克隆 | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| ·DNA 的 PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·目的基因片段的回收、连接、转化与检测 | 第22-24页 |
| ·目的片断的回收 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌 TOP10 感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·连接及转化 | 第24页 |
| ·重组质粒的 PCR 菌液检测与测序 | 第24-25页 |
| ·酿酒酵母 INVSC1 PDH 基因 cDNA 保守区的扩增 | 第25-26页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·PDH 基因保守区 cDNA 的 PCR 扩增 | 第25-26页 |
| ·小拟南芥 HPPD 基因 cDNA 保守区的扩增 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·HPPD 基因保守区 cDNA 的 PCR 扩增 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 第二章 植物表达载体的构建 | 第35-48页 |
| 1 材料与方法 | 第35-36页 |
| ·酶和试剂 | 第35页 |
| ·菌种与表达载体 | 第35页 |
| ·仪器与设备 | 第35-36页 |
| 2 试验方法 | 第36-39页 |
| ·菌种活化 | 第36页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·质粒的限制性内切酶酶切反应 | 第37-38页 |
| ·DNA 片断连接反应体系 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组质粒的检测 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-46页 |
| ·pCAMBIA3300-35S-PDH-Tnos-35S-HPPD-Tnos 表达载体的构建 | 第39-43页 |
| ·同尾酶的应用 | 第43-44页 |
| ·阳性菌落的 PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 农杆菌介导的青花菜遗传转化研究 | 第48-58页 |
| 1 材料 | 第48-49页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·表达载体及菌种 | 第48-49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| 2 试验方法 | 第49-52页 |
| ·农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备及转化 | 第49-50页 |
| ·农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第49-50页 |
| ·冻融法转化农杆菌 LBA4404 | 第50页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第50页 |
| ·DKN 筛选浓度预实验 | 第50页 |
| ·农杆菌转化 | 第50-51页 |
| ·转化芽的筛选、增殖及生根 | 第51页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第51-52页 |
| ·DKN 抗性分析 | 第51页 |
| ·转基因植株 DNA 的提取 | 第51页 |
| ·农杆菌 LBA4404 转化子质粒 DNA 的提取 | 第51页 |
| ·外源基因的 PCR 检测 | 第51-52页 |
| ·组培苗的移植 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-56页 |
| ·影响芽分化的因素 | 第52-54页 |
| ·农杆菌活性对侵染效率的影响 | 第52页 |
| ·外植体对芽分化及生根的影响 | 第52-53页 |
| ·预培养时间对芽分化的影响 | 第53页 |
| ·侵染时间对芽分化的影响 | 第53-54页 |
| ·表达载体 pCAMBIA3300-35S-PDH-Tnos-35S-HPPD-Tnos 转化农杆菌 | 第54-55页 |
| ·DKN 筛选浓度的确定 | 第55-56页 |
| ·转基因植株的筛选与鉴定 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| ·农杆菌对转化效率的影响 | 第56页 |
| ·预培养时间对转化效率的影响 | 第56-57页 |
| ·不同外植体对芽分化及生根的影响 | 第57页 |
| ·PCR 检测可靠性 | 第57-58页 |
| 第四章 结论与展望 | 第58-59页 |
| 1 结论 | 第58页 |
| 2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附录 1:主要缩略词表 | 第63-65页 |
| 附录 2: 常用溶液 | 第65-67页 |
| 附录 3: DKN 浓度的确定（以 Q2128 培养 25 d 为例） | 第67-69页 |
| 附录 4: 农杆菌转化青花菜（子叶&上胚轴） | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
