| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-24页 |
| ·DNA甲基化 | 第10-14页 |
| ·DNA甲基化概述 | 第10-11页 |
| ·DNA甲基化转移酶 | 第11-13页 |
| ·体细胞核移植动物甲基化模式 | 第13-14页 |
| ·基因组印记 | 第14-17页 |
| ·印记基因的特征 | 第14-15页 |
| ·基因组印记的发生 | 第15页 |
| ·基因组印记的发生机制 | 第15-16页 |
| ·基因组印记异常的影响 | 第16-17页 |
| ·基因组印记与DNA甲基化 | 第17-18页 |
| ·基因印记建立与甲基化状态变化 | 第17页 |
| ·基因组印记异常与甲基化状态变化 | 第17-18页 |
| ·印记基因Igf2和H19 | 第18-20页 |
| ·Igf2基因概述 | 第18页 |
| ·H19基因概述 | 第18-19页 |
| ·H19/Igf2的印记模式 | 第19-20页 |
| ·DNA甲基化的研究方法 | 第20-23页 |
| ·甲基化敏感性限制性内切酶法 | 第21页 |
| ·硫酸盐直接测序法 | 第21-22页 |
| ·甲基化特异性PCR法 | 第22-23页 |
| ·试验内容和意义 | 第23-24页 |
| 2 试验材料与方法 | 第24-33页 |
| ·试验材料 | 第24-26页 |
| ·试验用早期胚胎 | 第24页 |
| ·试验药品及试剂 | 第24页 |
| ·主要试剂配制 | 第24-25页 |
| ·试验仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·体细胞核移植重构胚胎的激活与收集 | 第26-27页 |
| ·不同时期体外受精胚胎的培养与收集 | 第27页 |
| ·总DNA的亚硫酸盐变性及DNA提取 | 第27-28页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第28-30页 |
| ·Igf2甲基化引物设计 | 第28-29页 |
| ·Igf2基因PCR扩增反应体系及条件 | 第29-30页 |
| ·PCR产物检测 | 第30页 |
| ·PCR反应产物克隆 | 第30-32页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第30-31页 |
| ·Igf2基因与pMD18-T载体连接 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第32页 |
| ·数据分析 | 第32-33页 |
| 3 试验结果与分析 | 第33-45页 |
| ·目的序列的扩增结果 | 第33页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·甲基化测序结果和分析 | 第34-36页 |
| ·IVF早期胚胎甲基化状态 | 第34-35页 |
| ·SCNT早期胚胎甲基化状态 | 第35-36页 |
| ·Igf2基因在IVF及SCNT早期胚胎中印记的动态模式 | 第36-45页 |
| ·Igf2基因在IVF和SCNT甲基化状态分析 | 第36-38页 |
| ·SCNT胚DMR1区甲基化水平较IVF胚差异的均一化处理 | 第38-39页 |
| ·Igf2基因的DMR1区域各位点甲基化状态分析 | 第39-43页 |
| ·SCNT胚各CpG位点甲基化水平较IVF胚差异的均一化处理 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-50页 |
| ·亚硫酸盐变性直接测序(BSP) | 第45-46页 |
| ·DNA基因组亚硫酸盐变性 | 第45页 |
| ·影响亚硫酸盐变性直接测序的因素 | 第45-46页 |
| ·印记基因Igf2在早期胚胎的甲基化状态 | 第46-47页 |
| ·印记基因Igf2甲基化位点状态 | 第47-48页 |
| ·印记基因Igf2中DMR区域甲基化异常对早期胚胎发育的影响 | 第48-49页 |
| ·影响克隆胚胎成活率的因素 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
