| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第7-10页 |
| 1.文献综述 | 第10-25页 |
| ·水稻纹枯病介绍 | 第10-13页 |
| ·水稻纹枯病病菌 | 第10-12页 |
| ·水稻纹枯病菌的防治 | 第12-13页 |
| ·水稻纹枯病突变体的构建方法 | 第13-15页 |
| ·物理诱变 | 第13页 |
| ·化学诱变 | 第13-14页 |
| ·外源基因导入诱变 | 第14-15页 |
| ·农杆菌介导转化原理及其转化方式 | 第15-20页 |
| ·农杆菌介导转化原理 | 第16-17页 |
| ·农杆菌介导外源T-DNA整合基因组的方式 | 第17-19页 |
| ·农杆菌介导转化法在纹枯病以及其他真菌病害中的应用 | 第19页 |
| ·农杆菌介导转化法在真菌病害中的应用前景 | 第19-20页 |
| ·水稻纹枯病菌转化体系 | 第20-21页 |
| ·筛选标记 | 第20页 |
| ·真菌转化载体——双元载体 | 第20-21页 |
| ·启动子 | 第21页 |
| ·侧翼序列扩增方法 | 第21-23页 |
| ·Tail-PCR | 第21-22页 |
| ·反向PCR(I-PCR) | 第22-23页 |
| ·水稻纹枯病菌突变体库构建的目的及意义 | 第23-25页 |
| ·水稻纹枯病菌突变体库构建的目的 | 第23-24页 |
| ·水稻纹枯病菌突变体库构建的目的 | 第24页 |
| ·水稻纹枯病菌突变体库构建的意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-40页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·水稻纹枯病菌材料 | 第25页 |
| ·菌株和载体 | 第25页 |
| ·化学试剂和分子试剂 | 第25-26页 |
| ·仪器设备 | 第26页 |
| ·细菌培养基 | 第26页 |
| ·真菌培养基 | 第26-27页 |
| ·适合水稻纹枯病菌转化的培养基 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-40页 |
| ·原生质体的制备、纯化、再生 | 第27-30页 |
| ·水稻纹枯病菌菌丝块的制备 | 第30页 |
| ·双元转化载体的构建及检测 | 第30-31页 |
| ·双元载体转化农杆菌 | 第31-33页 |
| ·农杆菌EHA105转化原生质体和菌丝块 | 第33-38页 |
| ·农杆菌介导转化与REMI、原生质体介导转化的转化效率比较 | 第38-39页 |
| ·转化子侧翼序列克隆 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-67页 |
| ·原生质体的制备、纯化、再生 | 第40-49页 |
| ·原生质体的制备、纯化 | 第40-45页 |
| ·原生质体的再生及优化 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| ·双元载体的构建、检测以及转化检测 | 第49-51页 |
| ·双元载体的构建检测 | 第49-51页 |
| ·双元载体的转化检测 | 第51页 |
| ·农杆菌介导转化转化子的检测 | 第51-54页 |
| ·微波-超声波辅助提取DNA的检测 | 第51-52页 |
| ·转化子hyg和sGFP基因PCR检测 | 第52-53页 |
| ·转化子荧光显微观察 | 第53-54页 |
| ·农杆菌介导转水稻纹枯病菌体系构建 | 第54-60页 |
| ·AS对转化子获得的影响 | 第55页 |
| ·AS浓度对转化的影响 | 第55-56页 |
| ·农杆菌/原生质体比对转化的影响 | 第56-57页 |
| ·共培养温度对转化的影响 | 第57-58页 |
| ·预培养时间、共培养时间对转化的影响 | 第58-59页 |
| ·农杆菌介导转化与REMI、原生质体介导转化的比较 | 第59-60页 |
| ·农杆菌介导转化原生质体、菌丝的比较 | 第60页 |
| ·突变子菌落形态、菌丝形态、致病性观察 | 第60-64页 |
| ·转化子形态观察 | 第60-61页 |
| ·突变子生长速度测定 | 第61-62页 |
| ·菌丝形态观察以及其与标准菌株融合 | 第62-63页 |
| ·突变出侵染水稻叶荧光观察以及致病性观察 | 第63-64页 |
| ·突变株侧翼序列扩增 | 第64-67页 |
| 4. 讨论与结论 | 第67-69页 |
| ·水稻纹枯病菌原生质体的制备、纯化、再生 | 第67页 |
| ·双元表达载体的构建 | 第67页 |
| ·农杆菌介导转化原生质体体系的构建与优化 | 第67-68页 |
| ·转化子的的检测 | 第68页 |
| ·突变子的形态、致病性观察 | 第68页 |
| ·突变子侧翼序列的扩增 | 第68-69页 |
| 5 后续实验展望 | 第69-70页 |
| ·全长突变子基因克隆 | 第69页 |
| ·突变基因与绿色荧光蛋白基因融合研究基因细胞定位 | 第69页 |
| ·功能基因的互补、干涉验证 | 第69-70页 |
| 6.主要结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第76页 |
