产脂肪酶菌株的筛选、脂肪酶基因的克隆与表达及其性质研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-17页 |
| ·脂肪酶概述 | 第11-13页 |
| ·脂肪酶的概念 | 第11页 |
| ·脂肪酶的来源与生产 | 第11-12页 |
| ·筛选产脂肪酶的菌株 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的酶活测定方法 | 第13页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第13-14页 |
| ·洗涤业中脂肪酶的用途 | 第13页 |
| ·纺织业中脂肪酶的用途 | 第13-14页 |
| ·食品业中脂肪酶的用途 | 第14页 |
| ·生物催化中脂肪酶的用途 | 第14页 |
| ·在分子生物学方面脂肪酶的研究进展 | 第14-16页 |
| ·脂肪酶基因的克隆 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶基因的表达 | 第15-16页 |
| ·本研究的意义和实验内容 | 第16-17页 |
| 第2章 产脂肪酶菌株的筛选 | 第17-24页 |
| ·前言 | 第17页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·培养基及溶液 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·筛菌样品 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-20页 |
| ·菌株筛选 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶的酶活力的初步测定 | 第19页 |
| ·菌种鉴定 | 第19-20页 |
| ·结果与讨论 | 第20-23页 |
| ·产脂肪酶的菌株的筛选 | 第20-21页 |
| ·产脂肪酶的菌株的鉴定 | 第21-23页 |
| ·小结 | 第23-24页 |
| 第3章 脂肪酶基因的克隆 | 第24-34页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·培养基及溶液 | 第24-25页 |
| ·菌株及质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·引物序列 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·质粒抽提 | 第26页 |
| ·核酸电泳 | 第26页 |
| ·DNA片段凝胶回收 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌的转化方法 | 第27页 |
| ·TA克隆 | 第27页 |
| ·PCR扩增脂肪酶基因过程 | 第27-29页 |
| ·结果与讨论 | 第29-33页 |
| ·变形杆菌脂肪酶基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·短小芽孢杆菌来源的脂肪酶基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·铜绿假单胞菌来源的脂肪酶基因的克隆 | 第31-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第4章 重组表达载体的构建及目的基因的表达 | 第34-52页 |
| ·前言 | 第34页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·培养基与溶液 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·质粒介绍 | 第36-38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·脂肪酶基因的表达载体的构建及表达 | 第38-41页 |
| ·表达产物SDS-PAGE蛋白电泳的分析 | 第41-42页 |
| ·脂肪酶的活力测定 | 第42-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-50页 |
| ·lipK19的表达载体的构建及表达 | 第43-45页 |
| ·lipS6的表达载体的构建及表达 | 第45-47页 |
| ·lipA的表达载体的构建及表达 | 第47-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第5章 脂肪酶基本酶学性质的研究 | 第52-68页 |
| ·前言 | 第52页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·菌株及脂肪酶制备 | 第52页 |
| ·主要缓冲液 | 第52页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·脂肪酶的酶活的测定 | 第53-54页 |
| ·最适温度的测定 | 第54页 |
| ·最适pH的测定 | 第54页 |
| ·脂肪酶热稳定性的测定 | 第54页 |
| ·脂肪酶pH值耐受性的测定 | 第54页 |
| ·金属离子对脂肪酶活性的影响 | 第54页 |
| ·表面活性剂等对脂肪酶酶活的影响 | 第54-55页 |
| ·有机溶剂对脂肪酶活力的影响 | 第55页 |
| ·酯化底物特异性的研究 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-67页 |
| ·脂肪酶的最适温度 | 第55-57页 |
| ·脂肪酶最适pH值 | 第57-58页 |
| ·脂肪酶的热稳定性 | 第58-59页 |
| ·脂肪酶的pH耐受性的检测 | 第59-60页 |
| ·金属离子对脂肪酶酶活的影响 | 第60-61页 |
| ·表面活性剂等对脂肪酶活性的影响 | 第61-62页 |
| ·有机溶剂对脂肪酶酶活的影响 | 第62页 |
| ·酯化底物特异性 | 第62-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 第6章 总结与展望 | 第68-70页 |
| ·总结 | 第68页 |
| ·展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
