| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-24页 |
| 1 丝氨酸蛋白酶抑制剂的概述 | 第9-10页 |
| 2 丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的分布 | 第10-18页 |
| ·寄生虫中的丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第10-15页 |
| ·其他物种中的丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第15-18页 |
| 3 丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构与功能 | 第18-21页 |
| 4 丝氨酸蛋白酶抑制剂的作用机理 | 第21-22页 |
| 5 丝氨酸蛋白酶抑制剂的应用前景 | 第22-24页 |
| 第二章 长角血蜱 HLS2 基因原核表达载体的构建及表达 | 第24-46页 |
| 前言 | 第24页 |
| 1 材料和方法 | 第24-38页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·实验动物及蜱 | 第24-25页 |
| ·菌种、载体 | 第25页 |
| ·酶和主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器、设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-38页 |
| ·表达引物的设计 | 第26页 |
| ·长角血蜱总RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第27-28页 |
| ·RT- PCR 产物的回收与纯化 | 第28-29页 |
| ·目的片段与pET-30a(+)载体的酶切回收 | 第29页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第29页 |
| ·JM109 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第30-32页 |
| ·表达菌株的获得 | 第32页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第32页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第32-36页 |
| ·融合蛋白表达形式的鉴定 | 第36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·表达产物的Western-blotting 检测 | 第37-38页 |
| 2 结果 | 第38-43页 |
| ·长角血蜱总RNA 检测结果 | 第38-39页 |
| ·目的基因 HLS2 的 RT-PCR 扩增结果 | 第39页 |
| ·重组表达质粒 pET-30a-HLS2 的鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒的测序结果及序列分析 | 第39-41页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第41-43页 |
| ·Western blotting 分析 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 长角血蜱 HLS2 在毕赤酵母中的表达 | 第46-61页 |
| 前言 | 第46页 |
| 1 材料和方法 | 第46-53页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·蜱种、菌种和载体 | 第46页 |
| ·酶和主要试剂 | 第46-47页 |
| ·培养基和溶液 | 第47页 |
| ·主要仪器、设备 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-53页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第48-51页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-HLS2 的线性化 | 第51页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·电转化 | 第51页 |
| ·重组酵母菌株的筛选鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第52页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第52页 |
| ·表达产物的Western-blotting 检测 | 第52-53页 |
| 2 结果 | 第53-58页 |
| ·HLS2 基因的 PCR 扩增 | 第53页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-HLS2 的构建及鉴定 | 第53-55页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-HLS2 的构建 | 第53页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-HLS2 的鉴定 | 第53-55页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-HLS2 的线性化 | 第55页 |
| ·重组酵母菌株的筛选鉴定 | 第55-56页 |
| ·影印接种法筛选G418 抗性菌株结果 | 第55页 |
| ·重组酵母菌株的PCR 鉴定结果 | 第55-56页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第56-57页 |
| ·表达产物的Western-blotting 检测 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 第四章 HLS2 基因编码蛋白的结构预测 | 第61-68页 |
| 前言 | 第61页 |
| 1 材料和方法 | 第61-62页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-62页 |
| 2 结果 | 第62-66页 |
| ·长角血蜱 HLS2 基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列 | 第62-63页 |
| ·HLS2 基因编码蛋白二级结构和淋巴细胞表位的预测 | 第63-64页 |
| ·HLS2 基因编码蛋白二级结构的预测 | 第63页 |
| ·HLS2 基因编码蛋白抗原特异性淋巴细胞抗原表位的预测 | 第63-64页 |
| ·HLS2 基因编码蛋白糖基化位点的预测 | 第64-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 全文结论 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 作者简介 | 第78-79页 |
| 导师简介 | 第79-80页 |
