| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1.前言 | 第8-16页 |
| ·PKR的结构特征 | 第8-9页 |
| ·PKR的激活机制 | 第9-11页 |
| ·PKR的生物学功能 | 第11-12页 |
| ·PKR抗病毒作用 | 第11页 |
| ·PKR与细胞生长 | 第11页 |
| ·PICR与细胞分化 | 第11-12页 |
| ·PKR与信号传导 | 第12页 |
| ·PKR与细胞程序性死亡 | 第12页 |
| ·鉴定dsRBM的方法 | 第12页 |
| ·dsRBM与核酸的作用 | 第12-14页 |
| ·dsRBM可与多种核酸结合 | 第12-13页 |
| ·检验dsRBM与dsRNA结合能力的方法 | 第13-14页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第13页 |
| ·Mab-Sepharose实验 | 第13页 |
| ·Poly I：C-Sepharose吸附实验 | 第13-14页 |
| ·硝酸纤维素滤膜结合实验 | 第14页 |
| ·Northwestern实验 | 第14页 |
| ·dsRBM的聚合 | 第14-15页 |
| ·本研究的内容、目的和意义 | 第15-16页 |
| 2.材料与方法 | 第16-24页 |
| ·实验材料 | 第16-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第16-17页 |
| ·主要试剂、试剂盒 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·试剂盒 | 第17-18页 |
| ·载体和菌株 | 第18页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-24页 |
| ·CaPKR-like Za克隆载体的构建 | 第18-19页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·目的基因的克隆 | 第18-19页 |
| ·目的基因连接pMD-18T载体 | 第19页 |
| ·连接产物的转化与鉴定 | 第19页 |
| ·CaPKR-like Za原核表达载体的构建 | 第19-20页 |
| ·质粒的提取与酶切 | 第19-20页 |
| ·酶切产物的回收 | 第20页 |
| ·目的基因连接pET-32a载体 | 第20页 |
| ·连接产物的转化与鉴定 | 第20页 |
| ·原核表达 | 第20页 |
| ·表达产物的纯化 | 第20-21页 |
| ·凝胶移位分析 | 第21页 |
| ·P_(Za)与PolyI：C的结合 | 第21页 |
| ·不同溶度的P_(Za1Za2)与PolyI：C的结合 | 第21页 |
| ·P_(Za)与DNA的结合 | 第21页 |
| ·P_(Za)聚合分析 | 第21页 |
| ·Western免疫印迹 | 第21-24页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第21-22页 |
| ·多克隆抗体的特异性和效价检测 | 第22页 |
| ·鲫鱼组织抽提液的制备 | 第22页 |
| ·CAB细胞蛋白的制备 | 第22-23页 |
| ·Western免疫印迹 | 第23-24页 |
| 3.实验结果 | 第24-32页 |
| ·CaPKR-like Za克隆载体的构建 | 第24-25页 |
| ·目的基因的克隆 | 第24页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第24-25页 |
| ·CaPKR-like Za原核表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·质粒双酶切实验 | 第25页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第25-26页 |
| ·原核表达与纯化 | 第26-28页 |
| ·表达载体的选择 | 第26-27页 |
| ·CaPKR-like Za结构域的原核表达 | 第27页 |
| ·表达产物的纯化 | 第27-28页 |
| ·P_(Za)与核酸的结合 | 第28-29页 |
| ·P_(Za)与PolyI：C的结合 | 第28页 |
| ·P_(Za)与DNA的结合 | 第28-29页 |
| ·P_(Za)聚合分析 | 第29-30页 |
| ·Western免疫印迹 | 第30-32页 |
| ·多克隆抗体的特异性和效价检测 | 第30页 |
| ·Western blotting检验CaPKR-like组织表达特性 | 第30-31页 |
| ·Western blotting检验CaPKR-like在CAB细胞的表达特性 | 第31-32页 |
| 4.分析与讨论 | 第32-36页 |
| ·CaPKR-like Za结构域的原核表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·表达载体的选择 | 第32页 |
| ·pET-32a／Za序列测定 | 第32-33页 |
| ·表达产物的纯化 | 第33页 |
| ·P_(Za)功能的初步分析 | 第33-35页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第33-34页 |
| ·P_(Za)与核酸分子的结合 | 第34-35页 |
| ·P_(Za)聚合实验 | 第35页 |
| ·CaPKR-like表达特性 | 第35-36页 |
| 5.结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-41页 |
| 附录 | 第41-43页 |
| 缩略语表 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43页 |
