| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 第一节 斑节对虾简介 | 第12页 |
| 第二节 甲壳动物免疫 | 第12-18页 |
| ·甲壳动物免疫机制 | 第12-18页 |
| ·表层屏障免疫 | 第13页 |
| ·细胞性防御 | 第13-14页 |
| ·细胞的吞噬作用 | 第13-14页 |
| ·结节作用 | 第14页 |
| ·包囊作用 | 第14页 |
| ·体液性免疫 | 第14-18页 |
| ·免疫识别 | 第15页 |
| ·凝集素 | 第15-16页 |
| ·溶菌酶和溶血素 | 第16-17页 |
| ·酚氧化酶及酚氧化酶原激活系统 | 第17-18页 |
| ·抗菌肽和抗菌蛋白 | 第18页 |
| 第三节 补体系统 | 第18-23页 |
| ·补体系统组成 | 第18-19页 |
| ·补体系统的功能 | 第19-20页 |
| ·补体系统的激活途径 | 第20-22页 |
| ·补体受体研究进展 | 第22-23页 |
| 第四节 丝裂原活化蛋白激酶信号途径（MAPK） | 第23-31页 |
| ·MAPK 的组成 | 第23-26页 |
| ·ERK 途径的上游蛋白及各激酶的激活机制 | 第24-25页 |
| ·JNK/SAPK2 通路 | 第25页 |
| ·p38MAPK 通路 | 第25-26页 |
| ·MAPK 信号调控机理 | 第26-27页 |
| ·MAPK 信号通路的功能 | 第27-28页 |
| ·MAPK 信号通路的研究进展 | 第28-29页 |
| ·对虾免疫基因相关研究成果 | 第29-31页 |
| ·基因功能方面 | 第29-30页 |
| ·转录组方面的研究 | 第30-31页 |
| ·蛋白质组方面的研究 | 第31页 |
| 第五节 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 斑节对虾 C1qBP 基因克隆、表达分析及原核表达 | 第32-72页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·实验所用主要仪器设备 | 第33-34页 |
| ·试剂和培养基配制 | 第34-35页 |
| ·化学试剂 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-50页 |
| ·斑节对虾C1qBP 基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·菌落PCR 鉴定重组质粒 | 第36-37页 |
| ·斑节对虾C1qBP 的生物信息学分析 | 第37-38页 |
| ·斑节对虾C1qBP 表达分析 | 第38-39页 |
| ·总RNA 抽提及cDNA 合成 | 第38页 |
| ·半定量PCR | 第38页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第38-39页 |
| ·统计学分析 | 第39页 |
| ·PmC1qBP 基因的原核表达 | 第39-50页 |
| ·PmC1qBP 载体的构建 | 第39-44页 |
| ·PmC1qBP-ORF 片段的 PCR 扩增 | 第40页 |
| ·PmC1qBP-ORF 片段的 PCR 产物纯化 | 第40-41页 |
| ·PmC1qBP-ORF 片段PCR 产物纯化后的双酶切 | 第41页 |
| ·PmC1qBP-ORF 片段双酶切产物的切胶回收 | 第41-42页 |
| ·PET32a 质粒的提取 | 第42页 |
| ·PET32a 质粒的双酶切 | 第42-43页 |
| ·PET32a 质粒双酶切产物的切胶回收 | 第43页 |
| ·PmC1qBP-ORF 片段和 PET32a 质粒双酶切产物的连接 | 第43页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·重组质粒的转化 | 第43页 |
| ·菌落PCR 鉴定重组质粒和序列测定 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE 鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的Western bloting 检测 | 第45-46页 |
| ·PmC1qBP 片段融合蛋白的Ni~(2+) -NTA 树脂纯化 | 第46页 |
| ·PmC1qBP-PET32a 重组菌的扩大培养 | 第46页 |
| ·PmC1qBP 包涵体的制备及复性 | 第46-47页 |
| ·Ni~(2+)-NTA HisBind 树脂准备 | 第47页 |
| ·柱层析 | 第47页 |
| ·PmC1qBP 纯化蛋白的Western Bloting | 第47-48页 |
| ·C19 补体结合实验 | 第48-49页 |
| ·抗体制备的实验 | 第49页 |
| ·组织蛋白的Westen Bloting | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-69页 |
| ·RNA 提取 | 第50页 |
| ·PmC1qBP 基因的序列分析 | 第50-53页 |
| ·PmC1qBP 基因的高级结构预测 | 第53-54页 |
| ·PmC1qBP 与其他物种 C1qBP 同源性分析 | 第54-58页 |
| ·PmC1qBP 基因的mRNA 表达谱 | 第58-60页 |
| ·PmC1qBP 基因在雌雄个体不同组织中的半定量分析 | 第58-60页 |
| ·PmC1qBP 在雌雄个体不同组织中的定量分析 | 第60页 |
| ·PmC1qBP 的发育表达谱 | 第60-62页 |
| ·PmC1qBP 对 LPS、PGN、弧菌应激表达谱 | 第62-63页 |
| ·PmC1qBP 的原核表达 | 第63-66页 |
| ·PmC1qBP-PET32a 重组载体的构建 | 第63-64页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第64-65页 |
| ·采用BCA 方法测定融合蛋白浓度 | 第65-66页 |
| ·补体C1q 结合实验 | 第66-67页 |
| ·rC1qBP 多克隆抗体制备 | 第67-69页 |
| ·C1qBP 的抗体特异性检测和效价分析 | 第68-69页 |
| ·组织蛋白的 Western-blot | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-72页 |
| 第三章 斑节对虾MP1 全长cDNA 的克隆与表达分析 | 第72-84页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·实验所用材料 | 第73页 |
| ·免疫挑战实验 | 第73页 |
| ·RNA 的提取和cDNA 的合成 | 第73-74页 |
| ·MP1 基因全长CDNA 的扩增 | 第74-75页 |
| ·序列分析 | 第75页 |
| ·RT-PCR 和real-time PCR 分析 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-82页 |
| ·Pm MP1 生物信息学分析 | 第75-77页 |
| ·MP1 基因的高级结构预测 | 第77-78页 |
| ·序列比对和系统进化树构建 | 第78-79页 |
| ·组织表达特征 | 第79-80页 |
| ·在不同性腺发育阶段 MP1 的表达特征 | 第80-81页 |
| ·LPS 和PGN 刺激后MP1 的表达特征 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 全文总结 | 第84-86页 |
| 1. 斑节对虾 C1qBP 基因特征和表达分析 | 第84页 |
| 2. 斑节对虾 MP1 基因特征和表达分析 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 硕士期间发表论文及参加会议 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
