| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1 雌激素受体β（Estrogen Receptor Beta， ERβ）研究概况 | 第11-13页 |
| ·雌激素受体 | 第11-12页 |
| ·雌激素受体与癌症 | 第12-13页 |
| 2 RNA 结合蛋白 | 第13-15页 |
| 3 ILF3 蛋白概述 | 第15-18页 |
| ·ILF3 蛋白结构 | 第15-16页 |
| ·ILF3 功能 | 第16-18页 |
| 4 本课题研究目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 RNA 亲和纯化及 EMSA 验证 ILF3 与 ERβ 3’UTR 结合作用 | 第20-32页 |
| 1 前言 | 第20-21页 |
| 2 实验材料，试剂和仪器 | 第21-23页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·实验试剂 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第22页 |
| ·溶液配制 | 第22-23页 |
| 3 方法 | 第23-28页 |
| ·MBP-MS2 蛋白表达 | 第23-24页 |
| ·MBP-MS2 融合蛋白纯化 | 第24-25页 |
| ·样品制备 | 第24页 |
| ·Amylose Resin 柱纯化 | 第24页 |
| ·Ni~+柱纯化 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定纯化结果 | 第24-25页 |
| ·体外转录 RNA | 第25-26页 |
| ·体外转录模板制备 | 第25页 |
| ·体外转录 ERβ 3’UTR 和 ERβ coding RNA | 第25-26页 |
| ·RNA pull-down | 第26页 |
| ·Western Blot | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE | 第26-27页 |
| ·Western 印迹 | 第27页 |
| ·EMSA 实验 | 第27-28页 |
| ·FLAG-ILF3 蛋白纯化 | 第27页 |
| ·凝胶阻滞 | 第27-28页 |
| 4 结果 | 第28-31页 |
| ·MBP-MS2 融合蛋白的表达与纯化 | 第28-29页 |
| ·RNA 转录与 Pull-down | 第29页 |
| ·Western Blot 验证 RNA pull-down 结果 | 第29-30页 |
| ·EMSA 实验结果 | 第30-31页 |
| 5 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 雌激素诱导及 ILF3 过表达对 ERβ的影响 | 第32-45页 |
| 1 前言 | 第32页 |
| 2 实验材料，试剂和仪器 | 第32-34页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·实验试剂 | 第32-33页 |
| ·实验仪器 | 第33页 |
| ·溶液配制 | 第33-34页 |
| 3 方法 | 第34-40页 |
| ·雌激素诱导实验 | 第34-35页 |
| ·细胞培养 | 第34页 |
| ·蛋白样品制备 | 第34页 |
| ·Western Blot | 第34-35页 |
| ·ILF3 过表达载体构建 | 第35-39页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·Total RNA 提取 | 第35页 |
| ·RNA 纯度，浓度鉴定 | 第35-36页 |
| ·cDNA 制备 | 第36页 |
| ·PCR 扩增 ilf3 基因 | 第36页 |
| ·PCR 产物回收 | 第36页 |
| ·pcDNA3.1（+）载体抽提 | 第36-37页 |
| ·EcoR I 和 BamH I 双酶切 | 第37页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第37页 |
| ·T4DNA 连接酶连接 | 第37页 |
| ·E.coli DH5α感受态制备 | 第37-38页 |
| ·转化 | 第38页 |
| ·菌落 PCR 鉴定 | 第38页 |
| ·双酶切鉴定 | 第38页 |
| ·测序鉴定 | 第38页 |
| ·碱裂解法大量抽提质粒 | 第38-39页 |
| ·细胞转染 | 第39-40页 |
| ·免疫印迹 | 第40页 |
| 4 实验结果 | 第40-44页 |
| ·雌激素诱导实验结果 | 第40-41页 |
| ·ILF3 过表达载体构建结果 | 第41-42页 |
| ·ilf3 基因 PCR 扩增结果 | 第41页 |
| ·ilf3 基因片段和 pcDNA3.1(+)载体酶切结果 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定结果 | 第42页 |
| ·融合蛋白 pcDNA3.1（+）-FLAG-ILF3 的表达与鉴定 | 第42-43页 |
| ·ILF3 过表达对 ER 的调控 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 利用 RNA 干扰技术研究下调 ILF3，ERβ对细胞内雌激素信号通路的影响 | 第45-58页 |
| 1 前言 | 第45-46页 |
| 2 试剂，材料与仪器 | 第46-47页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·实验试剂 | 第46-47页 |
| ·实验仪器 | 第47页 |
| ·相关溶液 | 第47页 |
| 3 实验方法 | 第47-52页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| ·寡核苷酸片段退火 | 第48页 |
| ·pLKO.1-TRC 质粒抽提 | 第48页 |
| ·pLKO.1-TRC 载体的双酶切和连接 | 第48-49页 |
| ·stable3 感受态细胞制备 | 第49页 |
| ·转化 | 第49页 |
| ·酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·测序鉴定 | 第50页 |
| ·碱裂解法大量抽提质粒 | 第50页 |
| ·细胞培养 | 第50页 |
| ·病毒包装及侵染 | 第50-51页 |
| ·病毒包装 | 第50-51页 |
| ·病毒浓缩 | 第51页 |
| ·病毒侵染及稳定株的筛选 | 第51页 |
| ·Western Blot | 第51页 |
| ·MTT 检测细胞增殖能力 | 第51-52页 |
| 4 实验结果 | 第52-56页 |
| ·双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·pLKO.1-ILF3-shRNA 干扰 MCF7 细胞稳定株的筛选 | 第53页 |
| ·ILF3 干扰后，雌激素受体 ERα，ERβ蛋白变化 | 第53-54页 |
| ·pLKO.1-ILF3-shRNA 干扰 239T 细胞稳定株的筛选 | 第54页 |
| ·pLKO.1-ERβ-shRNA 干扰 MCF7 细胞稳定株的筛选 | 第54-55页 |
| ·ERβ干扰后，雌激素受体 ERα，ILF3 蛋白变化 | 第55页 |
| ·ILF3 表达量下调细胞的增殖能力 | 第55-56页 |
| 5 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 1 结论 | 第58页 |
| 2 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 发表论文情况 | 第67页 |
