| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·几丁质酶研究进展 | 第10-13页 |
| ·几丁质酶概述 | 第10-11页 |
| ·木霉几丁质酶研究进展 | 第11-13页 |
| ·植物转化方法 | 第13-14页 |
| ·农杆菌转化法 | 第13-14页 |
| ·转基因番茄研究进展 | 第14-17页 |
| ·转基因抗病番茄的研究 | 第15-16页 |
| ·转基因番茄抗真菌病研究 | 第15页 |
| ·转基因番茄抗病毒病研究 | 第15-16页 |
| ·番茄抗虫基因工程 | 第16页 |
| ·番茄抗除草剂工程 | 第16-17页 |
| ·番茄抗逆基因工程 | 第17页 |
| ·内含子与植物基因工程 | 第17-18页 |
| ·转基因植物基因沉默及预防策略 | 第18-19页 |
| ·番茄基因工程展望 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 几丁质酶基因的克隆及植物表达载体的构建 | 第22-38页 |
| ·材料与方法 | 第22-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·酶和试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基及培养条件 | 第23页 |
| ·菌种保藏技术 | 第23页 |
| ·几丁质酶基因的克隆 | 第23-27页 |
| ·绿色木霉LTR-2基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·PCR引物设计与PCR扩增反应 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·PCR样品的纯化 | 第25-26页 |
| ·连接反应 | 第26页 |
| ·CaCl_2法转化大肠杆菌 | 第26页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第26页 |
| ·转化质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第27页 |
| ·目的基因的全序列测定 | 第27页 |
| ·基因序列分析 | 第27页 |
| ·植物表达载体pCHI1302-42的构建 | 第27-28页 |
| ·42kDa几丁质酶基因与pCAMBIA1300的连接 | 第27页 |
| ·正向连接重组质粒的筛选 | 第27-28页 |
| ·42kDa几丁质酶基因片段的获得 | 第28页 |
| ·42kDa几丁质酶基因与植物表达载体的连接 | 第28页 |
| ·农杆菌的冻融法转化 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-36页 |
| ·绿色木霉LTR-2 42kDa几丁质酶基因的克隆 | 第29页 |
| ·重组质粒pMChi42限制性内切酶酶切分析 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pMChi42所携带的外源片段的核苷酸全序列测定 | 第30-31页 |
| ·42kDa几丁质酶基因及其所编码蛋白的性质分析 | 第31-34页 |
| ·pCHI1302-42的构建方案 | 第34-35页 |
| ·正向连接重组质粒的筛选 | 第34-35页 |
| ·42kDa几丁质酶基因与植物表达载体的连接 | 第35页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404转化菌株筛选 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 利用42kDa几丁质酶编码基因转化番茄 | 第38-48页 |
| ·材料和方法 | 第38-44页 |
| ·实验材料 | 第38页 |
| ·主要药品及试剂 | 第38-39页 |
| ·根癌农杆菌培养基 | 第39页 |
| ·植物组织培养培养基配制 | 第39-41页 |
| ·共培养培养基 | 第40页 |
| ·筛选分化培养基 | 第40页 |
| ·生根培养基 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41页 |
| ·番茄无菌苗的培养 | 第41页 |
| ·外植体的获得及处理 | 第41页 |
| ·外植体的转化 | 第41页 |
| ·筛选及分化培养 | 第41页 |
| ·生根培养 | 第41页 |
| ·再生植株的分子检测 | 第41-44页 |
| ·CTAB法小量提取植物基因组DNA | 第41-42页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)检测 | 第42页 |
| ·Southern blotting分析 | 第42-44页 |
| ·实验结果与分析 | 第44-47页 |
| ·激素对愈伤组织诱导的影响 | 第44页 |
| ·转基因植株的获得 | 第44-45页 |
| ·植物基因组DNA | 第45页 |
| ·再生植株PCR检测 | 第45-46页 |
| ·再生植株Southern blotting检测 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
