| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·小菜蛾生物适合度的研究进展 | 第14-16页 |
| ·保幼激素的生理效应及研究方法 | 第16-21页 |
| ·保幼激素对幼虫生长发育的调节 | 第16-17页 |
| ·保幼激素对昆虫滞育的调节 | 第17页 |
| ·保幼激素对胚胎发育的调节 | 第17-18页 |
| ·保幼激素对成虫生殖的调节 | 第18-19页 |
| ·保幼激素的代谢 | 第19-20页 |
| ·保幼激素的测定方法 | 第20-21页 |
| ·昆虫保幼激素环氧水解酶基因的研究进展 | 第21-23页 |
| ·本研究的意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·研究材料 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·小菜蛾生物适合度变化的测定 | 第24-26页 |
| ·小菜蛾对毒死蜱及氟虫腈的毒力测定 | 第24-25页 |
| ·幼虫历期的观察及幼虫体重的测定 | 第25页 |
| ·幼虫成活率的测定 | 第25页 |
| ·小菜蛾产卵量和孵化率的测定 | 第25-26页 |
| ·保幼激素生物含量的测量 | 第26-27页 |
| ·保幼激素的提取 | 第26页 |
| ·保幼激素的测定 | 第26-27页 |
| ·小菜蛾 JHEH 基因的克隆 | 第27-33页 |
| ·小菜蛾总 RNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·第一链 cDNA 的合成 | 第28页 |
| ·目的片段引物设计 | 第28页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶 DNA 片段回收、连接及转化、测序 | 第29页 |
| ·3 '-RACE 获得目的基因的 3'-端 | 第29页 |
| ·5 '-RACE 获得目的基因的 5'-端 | 第29-32页 |
| ·第一链 cDNA 合成 | 第30页 |
| ·第一链 cDNA 纯化 | 第30-31页 |
| ·cDNA 的 LD-PCR 扩增 | 第31页 |
| ·双链 cDNA PCR 产物的纯化 | 第31-32页 |
| ·5 '-RACE 反应体系的建立 | 第32页 |
| ·JHEH 基因全序列的获得 | 第32页 |
| ·JHEH 基因全序列的生物信息学分析 | 第32-33页 |
| ·JHEH 基本性质分析 | 第32页 |
| ·JHEH 的蛋白质的结构特征及亚细胞定位分析 | 第32-33页 |
| ·JHEH 氨基酸的序列比对以及进化树的构建 | 第33页 |
| ·JHEH 基因的 mRNA 表达量差异分析 | 第33-35页 |
| ·荧光定量 PCR 引物设计及验证 | 第33页 |
| ·小菜蛾的取样方法 | 第33页 |
| ·常规 PCR 的验证 | 第33-34页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第34页 |
| ·实时荧光定量 PCR 数据分析 | 第34-35页 |
| ·dsRNA 的体外转录 | 第35-36页 |
| ·dsRNA 的体外转录构建 | 第35页 |
| ·dsRNA 的纯化: | 第35-36页 |
| ·喂饲 dsRNA 试验 | 第36页 |
| ·干扰后的 JHEH 基因的表达量的分析 | 第36页 |
| ·数据分析方法 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-63页 |
| ·小菜蛾抗性适合度变化 | 第37-44页 |
| ·小菜蛾对毒死蜱及氟虫腈抗药性 | 第37-39页 |
| ·小菜蛾敏感品系对毒死蜱的致死中浓度 | 第37页 |
| ·小菜蛾抗毒死蜱品系对毒死蜱的致死中浓度 | 第37-38页 |
| ·小菜蛾敏感品系对氟虫腈的致死中浓度 | 第38-39页 |
| ·小菜蛾抗氟虫腈品系对氟虫腈的致死中浓度 | 第39页 |
| ·敏感品系与两种抗性品系的幼虫的发育历期 | 第39-40页 |
| ·敏感品系与两种抗性品系幼虫体重 | 第40-41页 |
| ·敏感品系与两种抗性品系幼虫成活率 | 第41-42页 |
| ·敏感品系与抗毒死蜱品系成虫产卵量 | 第42页 |
| ·敏感品系与抗毒死蜱品系卵孵化率 | 第42-43页 |
| ·敏感品系与抗毒死蜱品系成虫存活天数 | 第43-44页 |
| ·保幼激素与生长发育 | 第44-47页 |
| ·标准曲线 | 第44-45页 |
| ·小菜蛾幼虫保幼激素的含量变化 | 第45-47页 |
| ·保幼激素环氧水解酶基因 | 第47-55页 |
| ·确定保幼激素环氧水解酶基因 | 第47-48页 |
| ·小菜蛾幼虫总 RNA | 第48-49页 |
| ·JHEH 基因的 3’-RACE 和 5’-RACE | 第49-50页 |
| ·JHEH 基因 cDNA ORF | 第50页 |
| ·JHEH 基因全长 cDNA 序列 | 第50-51页 |
| ·JHEH 基因编码蛋白质结构 | 第51-53页 |
| ·小菜蛾与其它昆虫保幼激素环氧水解酶蛋白的相似性及同源性 | 第53-55页 |
| ·小菜蛾 JHEH mRNA 的表达差异 | 第55-59页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的特异性 | 第55-57页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的标准曲线 | 第57-58页 |
| ·小菜蛾幼虫的 JHEH 基因 mRNA 的表达差异 | 第58-59页 |
| ·喂饲 dsRNA 的效应分析 | 第59-63页 |
| ·dsRNA 的体外转录合成 | 第59-60页 |
| ·喂饲试验 RNAi 效应 | 第60-61页 |
| ·干扰后 JHEH 基因的表达量 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-67页 |
| ·小菜蛾抗性适合度代价 | 第63页 |
| ·保幼激素与蜕皮激素对昆虫生长发育的联合控制作用 | 第63-64页 |
| ·小菜蛾保幼激素与生长发育 | 第64页 |
| ·小菜蛾保幼激素环氧水解酶基因的克隆与表达 | 第64-65页 |
| ·小菜蛾 RNAi 方法 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 1 | 第74-75页 |
| 附录 2 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
