| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| ·概述 | 第7-8页 |
| ·Torulopsis glabrata 发酵生产丙酮酸中的糖酵解速度 | 第8页 |
| ·调控微生物细胞内NADH/NAD~+ | 第8-13页 |
| ·通过外源途径加速NADH 氧化再生 | 第9-10页 |
| ·胞内NADH 再生的实现和调控 | 第10-11页 |
| ·缺失竞争途径 | 第11页 |
| ·引入外源代谢途径 | 第11-13页 |
| ·本研究的主要内容 | 第13-14页 |
| 第二章 降低胞内NADH 加强光滑球拟酵母的丙酮酸生产速度 | 第14-21页 |
| ·前言 | 第14-15页 |
| ·材料和方法 | 第15-16页 |
| ·菌株 | 第15页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·培养方法 | 第15页 |
| ·葡萄糖、细胞浓度(DCW)测定 | 第15页 |
| ·葡萄糖酸、有机酸测定 | 第15-16页 |
| ·NADH、NAD~+和ATP 测定 | 第16页 |
| ·结果 | 第16-20页 |
| ·葡萄糖酸钠为唯一碳源对T. glabrata 生长和发酵生产丙酮酸的影响 | 第16-17页 |
| ·葡萄糖酸钠为混合碳源时对T. glabrata 发酵生产丙酮酸的影响 | 第17-18页 |
| ·不同葡萄糖酸钠添加时间对丙酮酸发酵影响 | 第18-19页 |
| ·添加葡萄糖酸钠对T. glabrata 发酵NADH 代谢的影响 | 第19-20页 |
| ·讨论 | 第20-21页 |
| 第三章 表达NADH 氧化酶对光滑球拟酵母NADH 代谢影响 | 第21-33页 |
| ·前言 | 第21-22页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·发酵培养方法 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·DNA 操作 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第24页 |
| ·尿嘧啶缺陷型菌株的构建 | 第24-25页 |
| ·表达质粒pYX212-noxE 的构建 | 第25-26页 |
| ·酵母电击转化及筛选 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第26页 |
| ·参数测定 | 第26页 |
| ·ATP/NADH/NAD~+的提取和测定 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-32页 |
| ·尿嘧啶缺陷型菌株的构建 | 第26-27页 |
| ·乳酸乳球菌noxE 基因的扩增和表达质粒的构建 | 第27-29页 |
| ·重组菌的构建 | 第29页 |
| ·过量表达NADH 氧化酶改善重组菌好氧生长性能及加速丙酮酸生产 | 第29-32页 |
| ·过量表达NADH 氧化酶对NADH 代谢的影响 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| 第四章 表达选择性氧化酶对光滑球拟酵母NADH 代谢的影响 | 第33-41页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·发酵培养方法 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| ·质粒p416-TEF 的提取 | 第34-35页 |
| ·目的片段的PCR 验证 | 第35页 |
| ·菌株T. glabrata-AOX1 的构建 | 第35页 |
| ·T. glabrata-AOX1 中质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·T. glabrata-AOX1 的菌落PCR | 第36页 |
| ·参数测定 | 第36页 |
| ·ATP/NADH/NAD~+的提取和测定 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-40页 |
| ·质粒p416-TEF 的提取及AOX1 基因片段验证 | 第37页 |
| ·表达AOX1 的T. glabrata 重组菌构建 | 第37页 |
| ·重组菌的质粒提取和菌落PCR 验证 | 第37-38页 |
| ·表达选择性氧化酶对T. glabrata 发酵生产丙酮酸的影响 | 第38-39页 |
| ·过量表达选择性氧化酶对NADH 代谢的影响 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
