| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-18页 |
| ·嗜水气单胞菌的概述 | 第9-10页 |
| ·嗜水气单胞菌的毒力因子 | 第10-14页 |
| ·嗜水气单胞菌胞外分泌物 | 第10-11页 |
| ·嗜水气单胞菌的结构蛋白及内毒素 | 第11-14页 |
| ·嗜水气单胞菌的外膜蛋白与aopB/aopD基因 | 第14-16页 |
| ·细菌基因缺失突变体的构建与筛选方法 | 第16-18页 |
| ·正向筛选方法 | 第16页 |
| ·负向筛选方法 | 第16-17页 |
| ·正负双向筛选系统的重组机制 | 第17-18页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-28页 |
| ·实验材料 | 第19-22页 |
| ·质粒、菌株 | 第19-21页 |
| ·工具酶、试剂 | 第21页 |
| ·主要培养基 | 第21页 |
| ·常用溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-28页 |
| ·嗜水气单胞菌基因组DNA提取 | 第22-23页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第23页 |
| ·连接与转化 | 第23-24页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法) | 第24页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·嗜水气单胞菌的PCR鉴定 | 第25页 |
| ·嗜水气单胞菌Ah2056株aopB/aopD上下游片段的克隆与鉴定 | 第25页 |
| ·中间转移质粒pSKaopB/aopD12的构建 | 第25-26页 |
| ·重组自杀性质粒pREaopB/aopD12的构建 | 第26-27页 |
| ·接合转移与AhaopB~-/aopD~-缺失株的筛选鉴定 | 第27-28页 |
| 4 结果与分析 | 第28-37页 |
| ·嗜水气单胞菌16SrRNA基因的克隆与序列分析 | 第28-29页 |
| ·aopB/aopD基因上下游片段的扩增 | 第29-30页 |
| ·aopB/aopD上下游片段的重组质粒的构建及测序 | 第30-32页 |
| ·重组质粒pSKaopB/aopD1的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pSKaopB/aopD12的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组自杀性质粒pREaopB/aopD12的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·AhaopB~-/aopD~-缺失株的筛选与鉴定 | 第35-37页 |
| 5 讨论 | 第37-40页 |
| ·致病菌的鉴定 | 第37-38页 |
| ·aopB/aopD基因的选择 | 第38-39页 |
| ·缺失株的筛选鉴定 | 第39-40页 |
| 6 小结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
