| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-28页 |
| ·生物固氮的意义 | 第11-12页 |
| ·生物固氮简介 | 第12-13页 |
| ·共生固氮的分子遗传研究进展 | 第13-18页 |
| ·结瘤基因 | 第13-16页 |
| ·固氮基因 | 第16-18页 |
| ·基因组研究 | 第18页 |
| ·与固氮相关基因克隆的主要实验技术 | 第18-22页 |
| ·克隆与固氮有关基因的方法 | 第18-19页 |
| ·鉴定与固氮相关基因克隆的主要实验技术 | 第19-22页 |
| ·根瘤菌竞争结瘤的分子遗传研究进展 | 第22-23页 |
| ·启动子的研究概况 | 第23-27页 |
| ·启动子的结构 | 第24页 |
| ·启动子的分类 | 第24-25页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第25-26页 |
| ·启动子的研究方法 | 第26-27页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第28页 |
| ·植物材料 | 第28-29页 |
| ·培养基及生长条件 | 第29-31页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·生长条件 | 第30页 |
| ·菌种保存 | 第30-31页 |
| ·抗菌素 | 第31页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第31-33页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第33-36页 |
| ·碱变性法提取质粒DNA | 第33页 |
| ·大量制备质粒DNA | 第33-34页 |
| ·试剂盒快速小量提取质粒 | 第34-35页 |
| ·质粒DNA的纯化、定量与沉淀 | 第35-36页 |
| ·酚/氯仿抽提 | 第35页 |
| ·质粒DNA的沉淀与贮存 | 第35-36页 |
| ·分光光度法测定DNA浓度 | 第36页 |
| ·电泳 | 第36-37页 |
| ·DNA酶切 | 第37页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第37页 |
| ·DNA酶切片段的分离与回收 | 第37-38页 |
| ·透析袋电泳法分离回收DNA片段 | 第37-38页 |
| ·试剂盒法回收 DNA片段 | 第38页 |
| ·DNA的连接 | 第38-39页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第39-40页 |
| ·快速制备E.coli的感受态细胞 | 第39页 |
| ·转化反应 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增 DNA片段 | 第40页 |
| ·根瘤菌总 DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·快速提取 | 第40页 |
| ·根瘤菌总DNA的大量提取 | 第40-41页 |
| ·三亲本接合 | 第41-42页 |
| ·根瘤菌生长曲线的测定 | 第42页 |
| ·大豆水培试验方法 | 第42-43页 |
| ·供试菌株 | 第42页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·大豆水培试验 | 第42页 |
| ·实验处理 | 第42页 |
| ·结瘤时间观察 | 第42页 |
| ·共生固氮效应的测定 | 第42-43页 |
| ·GUS活性的检测 | 第43-44页 |
| ·片段启动子活性的定性检测 | 第43页 |
| ·GUS(β-Glucuronidase)活性的定量测定 | 第43-44页 |
| ·数据统计 | 第44-45页 |
| 第三章 序列分析及启动子的活性测定 | 第45-52页 |
| ·ORF的DNA序列分析 | 第45-48页 |
| ·nifR3上游序列分析 | 第48页 |
| ·启动子目的片段的获得 | 第48-49页 |
| ·结合子的获得 | 第49-50页 |
| ·P1序列启动子活性的定性检测 | 第50页 |
| ·P1序列启动子gus活性的定量测定 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第四章 费氏中华根瘤菌HN01 nifR3基因突变体及互补体的构建 | 第52-58页 |
| ·pK18mob(pknockout vector)单交换重组质粒构建 | 第52-54页 |
| ·nifR3基因部分片段的克隆 | 第52-53页 |
| ·载体的酶切、连接、转化 | 第53页 |
| ·连入片段方向验证 | 第53-54页 |
| ·同源单交换构建突变体 | 第54-55页 |
| ·通过三亲本结合及突变体筛选 | 第54页 |
| ·突变体的验证 | 第54-55页 |
| ·互补菌株的构建 | 第55-56页 |
| ·互补菌株的获得 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 第五章 费氏中华根瘤菌HN01突变及互补株的生长情况和植株结瘤试验 | 第58-63页 |
| ·菌株生长情况的测定 | 第58-60页 |
| ·完全培养基中的生长情况 | 第58-59页 |
| ·基本培养基中的生长状况 | 第59-60页 |
| ·植株的单独结瘤效应及固氮效率 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 第六章 总结 | 第63-65页 |
| ·实验总结 | 第63-64页 |
| ·后续工作 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
