| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-36页 |
| ·动物乳腺反应器生产重组蛋白的研究进展 | 第12-15页 |
| ·动物乳腺生物反应器表达重组蛋白的研究概况 | 第13-15页 |
| ·动物乳腺生物反应器存在的问题及发展前景 | 第15页 |
| ·腺病毒及其载体的研究进展 | 第15-27页 |
| ·腺病毒的一般生物学特性 | 第16-18页 |
| ·腺病毒载体的构建 | 第18-24页 |
| ·腺病毒载体的优点 | 第24-25页 |
| ·腺病毒载体的应用 | 第25-27页 |
| ·人蛋白C 转基因的研究现状 | 第27-32页 |
| ·蛋白C 的结构特性及其作用 | 第28-30页 |
| ·重组人蛋白C 的研究状况 | 第30-32页 |
| ·人神经生长因子转基因的研究现状 | 第32-36页 |
| ·神经生长因子的结构 | 第33页 |
| ·神经生长因子的生物活性 | 第33页 |
| ·神经生长因子在临床上的应用 | 第33-34页 |
| ·神经生长因子的来源 | 第34页 |
| ·重组人神经生长因子的研究进展 | 第34-36页 |
| 第二章 人蛋白C 及人神经生长因子Beta cDNA 序列的克隆及其表达载体的构建 | 第36-56页 |
| ·材料与方法 | 第37-47页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-52页 |
| ·hPC 及hNGF-β全长cDNA 的扩增与序列分析 | 第47-50页 |
| ·hPC 及hNGF-β表达载体及穿梭载体的构建 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| ·人蛋白C 和人神经生长因子beta 基因序列的分离、克隆 | 第52-53页 |
| ·hPC 及hNGF-β表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第三章 人蛋白C 及人神经生长因子beta cDNA 在CHO 和293 细胞中的表达 | 第56-65页 |
| ·材料与方法 | 第56-60页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·方法 | 第57-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-62页 |
| ·四种载体转染CHO 和HEK293 细胞光镜检查结果 | 第60页 |
| ·转染CHO、HEK293 细胞mRNA 检测 | 第60-61页 |
| ·Western blot 检测结果 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·载体线性化对转染效率的影响 | 第62页 |
| ·关于双标记筛选表达载体的便利性 | 第62页 |
| ·关于外源基因导入方法的选择 | 第62-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第四章 同源重组法在细菌内制备重组腺病毒载体的研究 | 第65-74页 |
| ·材料和方法 | 第65-67页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·方法 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-69页 |
| ·穿梭载体的线性化 | 第67页 |
| ·重组腺病毒载体的鉴定 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| ·关于构建腺病毒载体的方法 | 第69-70页 |
| ·细菌内同源重组法构建重组腺病毒载体的优势 | 第70-71页 |
| ·影响大质粒转化的因素 | 第71-72页 |
| ·二次转化提高细菌内同源重组的成功率 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第五章 重组腺病毒的扩增及其在乳腺上皮细胞中表达的研究 | 第74-85页 |
| ·材料和方法 | 第74-78页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·方法 | 第75-78页 |
| ·结果与分析 | 第78-81页 |
| ·重组腺病毒的包装 | 第78-80页 |
| ·重组腺病毒的扩增 | 第80页 |
| ·重组腺病毒的纯化和滴度测定 | 第80页 |
| ·重组腺病毒在兔乳腺上皮细胞中的表达 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-84页 |
| ·腺病毒的生活周期 | 第81-83页 |
| ·腺病毒生产中的几个重要环节 | 第83页 |
| ·关于重组腺病毒滴度的测定 | 第83-84页 |
| ·关于重组腺病毒在乳腺上皮细胞中的表达 | 第84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第六章 重组腺病毒在兔乳腺中高效表达的研究 | 第85-95页 |
| ·材料和方法 | 第85-86页 |
| ·材料 | 第85页 |
| ·方法 | 第85-86页 |
| ·结果与分析 | 第86-92页 |
| ·兔乳腺感染病毒后rhNGF-β的表达 | 第86-88页 |
| ·兔乳腺感染病毒后hPC 的表达 | 第88-90页 |
| ·兔乳中所表达的rhNGF-β和rhPC 的活性分析 | 第90-92页 |
| ·讨论 | 第92-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 结论及创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-108页 |
| 附录1 人PC cDNA 序列 | 第108-109页 |
| 附录2 人PC cDNA 测序图 | 第109-113页 |
| 附录3 人神经生长因子cDNA 序列 | 第113-114页 |
| 附录4 神经生长因子βcDNA 测序图 | 第114-117页 |
| 缩略词和中英文对照表 | 第117-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |
