| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·甘露聚糖和甘露聚糖酶 | 第8页 |
| ·国内外的研究进展 | 第8-12页 |
| ·β-甘露聚糖酶的来源 | 第8-9页 |
| ·β-甘露聚糖酶理化性质 | 第9页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因的克隆及表达研究 | 第9页 |
| ·芽孢杆菌表达系统 | 第9-11页 |
| ·β-甘露聚糖酶结构生物学研究进展 | 第11-12页 |
| ·研究目的和意义 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-21页 |
| ·实验材料 | 第14页 |
| ·菌株 | 第14页 |
| ·酶和试剂 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14页 |
| ·缓冲液 | 第14页 |
| ·实验方法 | 第14-21页 |
| ·产β-甘露聚糖酶菌株的筛选与鉴定 | 第14-16页 |
| ·重组菌株pMA5-manA1168 (含信号肽)的构建及其生长、产酶特征分析 | 第16-17页 |
| ·重组菌株 pMA5-manA2a/B. subtilis 168(含信号肽及 His-Tag)的构建及其生长、产 酶特征分析 | 第17页 |
| ·β-甘露聚糖酶的酶学性质研究 | 第17-18页 |
| ·β-甘露聚糖酶耐酸性定点改造 | 第18-19页 |
| ·重组菌株pMA5-gmuG654/B. subtilis 168 发酵条件初步研究 | 第19-21页 |
| 第三章 结论与分析 | 第21-49页 |
| ·产β-甘露聚糖酶菌株的筛选与鉴定 | 第21-23页 |
| ·产β-甘露聚糖酶菌株的筛选 | 第21-22页 |
| ·菌株B10-02 的形态学特征 | 第22页 |
| ·菌株B10-02 的生理生化特征 | 第22-23页 |
| ·菌株B10-02 16S rRNA 序列分析 | 第23页 |
| ·重组菌株pMA5-manA1/B. subtilis 168 (不含信号肽)、pMA5-manA2/B. subtilis 168 (含信号肽)的构建及生长、产酶特征分析 | 第23-25页 |
| ·β-甘露聚糖酶基因的克隆 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pMA5-manA1、pMA5-manA2 的构建及酶切验证 | 第24页 |
| ·重组质粒pMA5-manA1、pMA5-manA2 转化B. subtilis 168 菌株 | 第24页 |
| ·重组菌株 pMA5-manA1/B. subtilis 168、pMA5-manA2/B. subtilis 168 的生长、产 酶特征分析 | 第24-25页 |
| ·重组菌株pMA5-manA2a/B. subtilis 168(含信号肽及His-Tag)的构建及 生长、产酶特征分析分析 | 第25-28页 |
| ·manA2a 基因PCR 产物的核酸电泳验证 | 第26页 |
| ·重组质粒pMA5-manA2a 酶切验证 | 第26-27页 |
| ·重组质粒pMA5-manA2a 转化B. subtilis 168 菌株 | 第27页 |
| ·重组菌株pMA5-manA2a/B. subtilis 168 的生长及产酶特征分析 | 第27-28页 |
| ·β-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质分析 | 第28-30页 |
| ·β-甘露聚糖酶的镍柱纯化及蛋白电泳分析 | 第28页 |
| ·β-甘露聚糖酶的最适温度与热稳定性 | 第28-29页 |
| ·β-甘露聚糖酶的最适pH 与pH 稳定性 | 第29页 |
| ·金属离子对β-甘露聚糖酶酶活力的影响 | 第29-30页 |
| ·Km 与Vmax | 第30页 |
| ·β-甘露聚糖酶耐酸性定点改造 | 第30-37页 |
| ·耐酸性改造位点的确立 | 第30-33页 |
| ·突变型重组菌株的构建 | 第33-34页 |
| ·突变β-甘露聚糖酶SDS-PAGE 电泳 | 第34-35页 |
| ·突变后 β-甘露聚糖酶酶学性质的研究 | 第35-36页 |
| ·突变型 β-甘露聚糖酶与野生型 β-甘露聚糖酶的三维结构对比分析 | 第36-37页 |
| ·重组菌株pMA5-gmuG654/B. subtilis 168 产β-甘露聚糖酶培养基的优化 | 第37-41页 |
| ·碳源对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第37-38页 |
| ·氮源对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第38页 |
| ·无机盐对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第38-40页 |
| ·金属离子对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第40-41页 |
| ·正交实验设计优化β-甘露聚糖酶发酵培养基成分 | 第41页 |
| ·重组菌株pMA5-gmuG654/B. subtilis 168 产β-甘露聚糖酶培养条件的优化 | 第41-43页 |
| ·初始pH 对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第41-42页 |
| ·温度对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第42页 |
| ·转速对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第42-43页 |
| ·接种量对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第43页 |
| ·5L 发酵罐放大实验 | 第43-47页 |
| ·5 L 发酵罐初步研究 | 第43-44页 |
| ·溶氧对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第44-45页 |
| ·pH 对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第45-46页 |
| ·温度对β-甘露聚糖酶发酵的影响 | 第46-47页 |
| ·结论与展望 | 第47-49页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| ·展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 | 第54页 |
