| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 绪论 | 第8-26页 |
| 1.微生物发酵生产燃料乙醇的研究背景 | 第8-12页 |
| 2.乙醇发酵微生物 | 第12-15页 |
| 3.基因工程在构建代谢木糖产乙醇的重组酿酒酵母工程菌的应用和进展 | 第15-21页 |
| 4.提高酿酒酵母对抑制物的耐毒性 | 第21-22页 |
| 5.原生质体融合的方法构建发酵木糖的酵母工程菌 | 第22-23页 |
| 6.展望 | 第23页 |
| 7.本文研究工作 | 第23-26页 |
| 第一章 木糖还原酶、木糖醇脱氢酶的克隆和酿酒酵母表达质粒的构建 | 第26-36页 |
| ·材料与方法 | 第26-32页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·分子克隆试剂和酶 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·微生物学技术 | 第27页 |
| ·分子生物学技术 | 第27-32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-36页 |
| ·PCR方法扩增Candida shehatae XYL1和Candida tropicalis XYL2基因 | 第32页 |
| ·Candida shehatae XYL1和Candida tropicalis XYL2基因的亚克隆 | 第32-33页 |
| ·重组酵母表达质粒pYES2-xy11和pDR195-xy12的构建 | 第33-36页 |
| 第二章 酵母的转化与转化子的验证 | 第36-43页 |
| ·材料与方法 | 第36-40页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-43页 |
| ·酵母转化 | 第40-41页 |
| ·酵母质粒的提取和PCR验证 | 第41-43页 |
| 第三章 木糖还原酶、木糖醇脱氢酶酶活的测定和基因的表达 | 第43-56页 |
| ·材料与方法 | 第43-48页 |
| ·测定阳性转化子的木糖还原酶、木糖醇脱氢酶酶活水平 | 第43-46页 |
| ·SDS-PAGE验证阳性转化子表达木糖还原酶和木糖醇脱氢酶的状况 | 第46-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-56页 |
| ·NADH标准方程的测定结果 | 第48-49页 |
| ·NADPH标准方程的测定结果 | 第49-50页 |
| ·蛋白质含量标准方程的测定结果 | 第50-51页 |
| ·pDR195和pDR195-xy12的阳性转化子木糖醇脱氢酶的比酶活测定 | 第51页 |
| ·pYES2和pYES2-xy11的阳性转化子木糖还原酶的比酶活测定 | 第51-53页 |
| ·SDS-PAGE方法检测阳性转化子木糖还原酶、木糖醇脱氢酶的表达 | 第53-56页 |
| 第四章 重组酵母染色体整合质粒的初步构建 | 第56-65页 |
| ·各质粒相关未知序列的测定与整合质粒构建的设计 | 第56-65页 |
| ·研究设计思路 | 第56页 |
| ·步骤与结果 | 第56-65页 |
| 第五章 总结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录1 氨基酸名称对照表 | 第74-75页 |
| 附录2 本人硕士阶段己发表或已接受的研究论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
