| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-36页 |
| ·小G 蛋白的结构 | 第14页 |
| ·小G 蛋白的功能 | 第14-16页 |
| ·Rab 蛋白家族 | 第16-23页 |
| ·Rab家族蛋白的结构 | 第17-18页 |
| ·Rab蛋白的定位 | 第18页 |
| ·Rab 白的功能 | 第18-20页 |
| ·Rab5蛋白及其效应因子 | 第20-23页 |
| ·Rab5蛋白的分布 | 第21页 |
| ·Rab5a的效应因子 | 第21页 |
| ·Rab5蛋白的功能 | 第21-23页 |
| ·蛋白质间的相互作用及研究方法 | 第23-34页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第24-28页 |
| ·酵母双杂交原理 | 第24-25页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第25-26页 |
| ·酵母双杂交系体系的局限性及扩展 | 第26-28页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第28-29页 |
| ·免疫共沉淀的原理 | 第28-29页 |
| ·免疫共沉淀的应用及局限性 | 第29页 |
| ·Pull-down技术 | 第29-30页 |
| ·Pull-down技术的原理 | 第30页 |
| ·Pull-down技术的应用及其局限性 | 第30页 |
| ·串联亲和纯化技术 | 第30-34页 |
| ·串联亲和纯化技术的原理 | 第31-32页 |
| ·串联亲和纯化技术的应用及其局限性 | 第32-34页 |
| ·本课题的研究意义 | 第34-36页 |
| ·稻瘟病菌中的Rab蛋白 | 第34-35页 |
| ·MoRab5效应因子 | 第35-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-65页 |
| ·材料 | 第36-42页 |
| ·主要化学试剂及实验材料 | 第36页 |
| ·各种酶、分子量标准及试剂盒 | 第36页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第36-41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-65页 |
| ·载体构建 | 第42-47页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·PCR | 第43页 |
| ·PCR 产物回收、酶切和连接 | 第43-44页 |
| ·质粒酶切与连接 | 第44页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第44-45页 |
| ·稻瘟病菌或稻瘟病菌侵染后的水稻叶片RNA 的提取 | 第45-46页 |
| ·RT-PCR | 第46-47页 |
| ·稻瘟病菌菌丝cDNA 文库的筛选 | 第47-53页 |
| ·酵母菌株Y187感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·酵母小量转化 | 第47-48页 |
| ·酵母质粒提取 | 第48页 |
| ·重组质粒的分子验证 | 第48-49页 |
| ·重组质粒对Y187细胞毒性检测 | 第49页 |
| ·重组质粒的自激活活性检测 | 第49页 |
| ·酵母交配 | 第49-50页 |
| ·酵母双倍体的筛选 | 第50页 |
| ·互作阳性克隆子的验证 | 第50-51页 |
| ·互作克隆子的回复杂交验证 | 第51-52页 |
| ·互作克隆子的双杂交验证 | 第52页 |
| ·阳性克隆子cDNA 片段的测序 | 第52-53页 |
| ·互作蛋白的生物信息学分析 | 第53页 |
| ·蛋白质理化特性分析 | 第53页 |
| ·蛋白质结构功能域预测 | 第53页 |
| ·蛋白基序（Motif）的搜索 | 第53页 |
| ·互作蛋白的筛选及验证 | 第53-59页 |
| ·蛋白在大肠杆菌内的诱导表达 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第54-55页 |
| ·His pull-down筛选MoRab5的互作蛋白 | 第55-58页 |
| ·GST融合蛋白的诱导与纯化（微量法） | 第58-59页 |
| ·实时定量PCR | 第59-61页 |
| ·实时定量 PCR 引物的设计 | 第59页 |
| ·cDNA 的合成 | 第59-60页 |
| ·最佳退火温度的确定 | 第60-61页 |
| ·MoRab5可能互作蛋白的功能研究 | 第61-65页 |
| ·敲除载体的构建 | 第61页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备 | 第61-62页 |
| ·稻瘟病菌原生质体转化和转化子筛选 | 第62页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA 的快速提取 | 第62-63页 |
| ·敲除突变体的表型分析及鉴定 | 第63-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-91页 |
| ·稻瘟病菌MoRab5正显性激活诱饵载体的构建 | 第65-67页 |
| ·激活型MoRab5-BD诱饵对酵母细胞毒性和自激活活性检测 | 第67-69页 |
| ·MoRab5的互作蛋白的筛选 | 第69-73页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第73-75页 |
| ·His pull-down筛选MoRab5 的互作蛋白 | 第75-77页 |
| ·pET-28a-MoRab5重组质粒的构建 | 第75-76页 |
| ·pET-28a-MoRab5融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第76-77页 |
| ·Western blot鉴定 | 第77页 |
| ·His Pull-down | 第77页 |
| ·质谱结果 | 第77-88页 |
| ·互作蛋白的qRT-PCR分析 | 第88-90页 |
| ·Rab5可能互作蛋白的功能研究 | 第90-91页 |
| 4 小结与讨论 | 第91-96页 |
| ·MoRab5互作蛋白可能是复杂的网络系统 | 第91-93页 |
| ·酵母双杂交结果分析 | 第93-96页 |
| ·假阳性和假阴性的产生 | 第93页 |
| ·X-α-gal检测 | 第93-94页 |
| ·酵母转化方法以及酵母质粒提取 | 第94页 |
| ·关于筛库的一些策略及体系评价 | 第94-96页 |
| 5 下一步研究工作及展望 | 第96-97页 |
| ·下一步研究工作 | 第96页 |
| ·展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-109页 |
| 附录1 若干几丁质结合蛋白基因的功能研究 | 第109-115页 |
| 附录2 本研究中所用的引物 | 第115-119页 |
| 附录3 酵母双杂交测序结果 | 第119-125页 |
| 附录4 各种主要试剂与缓冲液的配制 | 第125-138页 |
| 附录5 Pull down 结果肽段匹配表 | 第138-142页 |
| 附录6 MoRab5 互作蛋白 GO（gene ontology）分类表 | 第142-154页 |
| 致谢 | 第154页 |
