| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 副猪嗜血杆菌(HAEMOPHILUS PARASUIS,HPS)研究进展 | 第12-19页 |
| ·病原学 | 第12-13页 |
| ·细菌及培养特性 | 第12页 |
| ·血清学分型 | 第12-13页 |
| ·毒力因子 | 第13-16页 |
| ·脂多糖(LPS) | 第14页 |
| ·外膜蛋白(OMP)及D15 | 第14-15页 |
| ·转铁结合蛋白(TBP) | 第15-16页 |
| ·神经氨酸酶(NA) | 第16页 |
| ·荚膜多糖(CPS) | 第16页 |
| ·流行病学和致病机理 | 第16-18页 |
| ·副猪嗜血杆菌的流行病学 | 第16-17页 |
| ·致病机理 | 第17-18页 |
| ·免疫和预防 | 第18-19页 |
| 2 免疫蛋白质组研究进展 | 第19-23页 |
| ·免疫蛋白质组学 | 第19-20页 |
| ·免疫蛋白质组学的主要技术 | 第20-23页 |
| ·双向凝胶电泳技术 | 第20页 |
| ·半干转印和免疫检测 | 第20页 |
| ·数据分析 | 第20-21页 |
| ·生物质谱 | 第21-23页 |
| ·基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱 | 第22页 |
| ·液相色谱-电喷雾离子阱-串联质谱(LC/ESI-MS/MS) | 第22-23页 |
| ·生物信息学 | 第23页 |
| 3 反向疫苗学 | 第23-27页 |
| ·传统疫苗学 | 第23页 |
| ·反向疫苗学 | 第23-25页 |
| ·反向疫苗学在细菌疫苗研制中的应用 | 第25-27页 |
| 第二章 副猪嗜血杆菌5型外膜蛋白2-D图谱的建立及D15免疫原性鉴定 | 第27-54页 |
| 1 前言 | 第27页 |
| 2 实验材料 | 第27-31页 |
| ·菌株、培养基、质粒及康复血清 | 第27-28页 |
| ·主要实验仪器 | 第28页 |
| ·主要化学试剂 | 第28-29页 |
| ·主要溶液配方 | 第29-31页 |
| 3 实验方法 | 第31-37页 |
| ·SH0165菌株的培养条件 | 第31页 |
| ·外膜蛋白样品的制备 | 第31-32页 |
| ·蛋白定量 | 第32页 |
| ·双向电泳(2D-PAGE) | 第32-33页 |
| ·凝胶染色(银染) | 第33页 |
| ·图像分析及酶解 | 第33页 |
| ·MALDI-TOF-MS分析 | 第33-34页 |
| ·WESTERN-BLOT | 第34页 |
| ·蛋白克隆表达及纯化 | 第34-36页 |
| ·引物的设计与合成 | 第34页 |
| ·引物的设计与合成 | 第34页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35页 |
| ·表达菌株的构建 | 第35页 |
| ·蛋白诱导表达及纯化 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE电泳及WESTERN-BLOT | 第36页 |
| ·小鼠感染试验 | 第36-37页 |
| ·小鼠免疫保护力试验 | 第37页 |
| 4 实验结果 | 第37-49页 |
| ·分子量等电点理论值和试验值得比较 | 第37-38页 |
| ·副猪嗜血杆菌5型外膜蛋白双向电泳图谱分析 | 第38-39页 |
| ·使用康复血清进行的WESTERN-BLOT | 第39-40页 |
| ·MALDI-TOF-MS分析 | 第40-46页 |
| ·基因扩增结果 | 第46页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第47页 |
| ·WESTERN-BLOT免疫反向验证 | 第47-48页 |
| ·小鼠攻毒实验 | 第48页 |
| ·小鼠攻毒保护力试验 | 第48-49页 |
| 5 讨论 | 第49-54页 |
| ·外膜蛋白的提取方法 | 第49-50页 |
| ·关于分离的外膜蛋白 | 第50-51页 |
| ·关于筛选的免疫原性蛋白 | 第51页 |
| ·进一步选择免疫原性蛋白加以评价的原则 | 第51-52页 |
| ·D15的免疫原性分析 | 第52页 |
| ·免疫蛋白质组学是一种快速高效的方法 | 第52-54页 |
| 第三章 小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62页 |
