| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-26页 |
| 1.1 猪圆环病毒的病原学研究 | 第17-20页 |
| 1.1.1 猪圆环病毒的分类 | 第17页 |
| 1.1.2 猪圆环病毒的理化特征 | 第17页 |
| 1.1.3 猪圆环病毒的分子生物学特征 | 第17-19页 |
| 1.1.4 猪圆环病毒2型的致病机理 | 第19-20页 |
| 1.2 猪圆环病毒2型的流行现状 | 第20页 |
| 1.3 猪圆环病毒2型的检测 | 第20-22页 |
| 1.3.1 抗原检测 | 第20-21页 |
| 1.3.2 血清学检测 | 第21-22页 |
| 1.4 猪圆环病毒2型的疫苗研究进展 | 第22-25页 |
| 1.4.1 PCV2灭活疫苗 | 第22-23页 |
| 1.4.2 弱毒疫苗 | 第23页 |
| 1.4.3 基因工程疫苗 | 第23-25页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 2016-2018年间中国猪圆环病毒2型分子流行病学研究 | 第26-41页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-30页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第26-27页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第27页 |
| 2.1.3 DNA的提取及PCV2的检测 | 第27-28页 |
| 2.1.4 PCV2的遗传特异性分析 | 第28页 |
| 2.1.5 PCV2的重组分析 | 第28页 |
| 2.1.6 PCV2d HeB-1株和PCV2b LN-3株的致病性分析 | 第28-30页 |
| 2.2 结果 | 第30-38页 |
| 2.2.1 PCV2的检测结果 | 第30-32页 |
| 2.2.2 PCV2序列的遗传变异和系统发育分析 | 第32-33页 |
| 2.2.3 基因重组分析 | 第33页 |
| 2.2.4 Cap蛋白的氨基酸序列分析 | 第33页 |
| 2.2.5 PCV2d HeB-1株和PCV2b LN-3株的致病性分析 | 第33-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 猪圆环病毒2型ORF2-C3d-P28.3核酸疫苗的构建及其免疫原性研究 | 第41-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-47页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第42页 |
| 3.1.2 毒株、细胞株 | 第42页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第42页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第42页 |
| 3.1.5 pVAX1-ORF2和pVAX1-ORF2-C3d-P28.3质粒的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.6 重组质粒的转染和鉴定 | 第44-45页 |
| 3.1.7重组质粒pVAX1-ORF2和pVAX1-ORF2-C3d-P28.3的免疫仔猪保护实验 | 第45-46页 |
| 3.1.8 淋巴结的病变评价以及PCV2含量的测定 | 第46-47页 |
| 3.1.9 PCV2特异性IFN-γ-SC的测定 | 第47页 |
| 3.1.10 统计学分析 | 第47页 |
| 3.2 结果 | 第47-52页 |
| 3.2.1 重组载体的构建及体外瞬时感染 | 第47-48页 |
| 3.2.2 免疫仔猪攻毒后日增重以及产生抗体的检测 | 第48-50页 |
| 3.2.3 免疫后仔猪血清中病毒含量的测定 | 第50页 |
| 3.2.4 免疫后PCV2抗原的检测 | 第50-51页 |
| 3.2.5 免疫后PCV2特异性IFN-γ分泌细胞的数量测定 | 第51-52页 |
| 3.3 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 马赛克PCV2 SD株感染性克隆的构建 | 第53-74页 |
| 4.1 材料与方法 | 第54-62页 |
| 4.1.1 病毒与细胞 | 第54页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第54页 |
| 4.1.4 试验动物 | 第54-55页 |
| 4.1.5 马赛克Cap蛋白氨基酸序列的设计与分析 | 第55-57页 |
| 4.1.6 马赛克Cap蛋白诱骗表位的替换 | 第57页 |
| 4.1.7 马赛克PCV2 SD株的基因组获得 | 第57页 |
| 4.1.8 马赛克PCV2 SD株的感染性克隆的构建 | 第57-58页 |
| 4.1.9 马赛克PCV2 SD株的病毒拯救及鉴定 | 第58-60页 |
| 4.1.10 马赛克PCV2 SD株的电镜观察 | 第60页 |
| 4.1.11 马赛克PCV2 SD株的传代稳定性 | 第60-61页 |
| 4.1.12 马赛克PCV2 SD株在小鼠的免疫效力与诱骗抗体水平检测 | 第61-62页 |
| 4.1.13 统计学分析 | 第62页 |
| 4.2 结果 | 第62-72页 |
| 4.2.1 马赛克Cap蛋白氨基酸序列的获得 | 第62-64页 |
| 4.2.2 马赛克Cap蛋白诱骗表位的替换 | 第64-65页 |
| 4.2.3 马赛克PCV2 SD株的基因组获得 | 第65-67页 |
| 4.2.4 马赛克PCV2 SD株的感染性克隆的构建 | 第67-68页 |
| 4.2.5 马赛克PCV2 SD株的病毒拯救及鉴定 | 第68-70页 |
| 4.2.6 马赛克PCV2 SD株的电镜观察 | 第70页 |
| 4.2.7 马赛克PCV2 SD株的传代稳定性 | 第70页 |
| 4.2.8 马赛克PCV2 SD株免疫小鼠后的诱骗抗体水平检测 | 第70-71页 |
| 4.2.9 马赛克PCV2 SD株在小鼠的免疫效力 | 第71-72页 |
| 4.3 讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 稳定表达猪干扰素γ基因的PK-15细胞系构建及对PCV2增殖的增强作用 | 第74-88页 |
| 5.1 材料与方法 | 第74-81页 |
| 5.1.1 病毒、细胞与载体 | 第74页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第74-75页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第75页 |
| 5.1.4 猪脾脏总RNA的提取、纯化 | 第75页 |
| 5.1.5 RT-PCR反转录合成cDNA | 第75-76页 |
| 5.1.6 猪IFN-γ基因的扩增 | 第76-77页 |
| 5.1.7 猪IFN-γ真核表达载体的构建 | 第77-78页 |
| 5.1.8 测试PK-15细胞的G418耐受性 | 第78页 |
| 5.1.9 稳定高效表达PoIFN-γ的PK-15细胞系的构建 | 第78-80页 |
| 5.1.10 PK15-PoIFN-γ细胞系的生长曲线测定 | 第80页 |
| 5.1.11 PK15-PoIFN-γ细胞系对PCV2增值的影响 | 第80页 |
| 5.1.12 PoIFN-γ抗体对PCV2增值的抑制作用 | 第80-81页 |
| 5.1.13 统计学分析 | 第81页 |
| 5.2 结果 | 第81-86页 |
| 5.2.1 PoIFN-γ基因的获得 | 第81-82页 |
| 5.2.2 真核表达载体PCI-PoIFN-γ的构建与鉴定 | 第82页 |
| 5.2.3 PK15-PoIFN-γ细胞系构建与鉴定 | 第82-84页 |
| 5.2.4 PK15-PoIFN-γ细胞系的生长曲线 | 第84页 |
| 5.2.5 PK15-PoIFN-γ细胞系对PCV2增值的影响 | 第84-85页 |
| 5.2.6 PoIFN-γ抗体对PK15-PoIFN-γ细胞系增殖PCV2的抑制作用 | 第85-86页 |
| 5.3 讨论 | 第86-88页 |
| 第六章 猪圆环病毒2型改构马赛克Cap蛋白亚单位疫苗的研制 | 第88-102页 |
| 6.1 材料与方法 | 第88-94页 |
| 6.1.1 病毒与细胞 | 第88页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第88-89页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第89页 |
| 6.1.4 试验动物 | 第89页 |
| 6.1.5 改构马赛克Cap蛋白氨基酸序列的稀有密码子优化 | 第89页 |
| 6.1.6 改构马赛克Cap蛋白原核表达载体的构建 | 第89-90页 |
| 6.1.7 改构马赛克Cap蛋白原核表达与纯化 | 第90-91页 |
| 6.1.8 改构马赛克Cap蛋白的电镜分析 | 第91页 |
| 6.1.9 改构马赛克Cap蛋白亚单位疫苗的制备 | 第91页 |
| 6.1.10 改构马赛克Cap蛋白亚单位疫苗对仔猪的免疫效果 | 第91-94页 |
| 6.1.11 统计学分析 | 第94页 |
| 6.2 结果 | 第94-100页 |
| 6.2.1 改构马赛克Cap蛋白的基因及载体构建 | 第94-95页 |
| 6.2.2 改构马赛克Cap蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第95-96页 |
| 6.2.3 改构马赛克Cap蛋白的电镜鉴定 | 第96-97页 |
| 6.2.4 改构马赛克Cap蛋白亚单位疫苗对仔猪的免疫效果研究 | 第97-100页 |
| 6.3 讨论 | 第100-102页 |
| 第七章 PCV2病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备与筛选 | 第102-113页 |
| 7.1 材料与方法 | 第102-106页 |
| 7.1.1 试验动物、病毒与细胞 | 第102页 |
| 7.1.2 主要试验试剂 | 第102页 |
| 7.1.3 主要仪器设备 | 第102-103页 |
| 7.1.4 改构马赛克Cap蛋白的获得 | 第103页 |
| 7.1.5 动物免疫 | 第103页 |
| 7.1.6 细胞融合 | 第103-104页 |
| 7.1.7 阳性杂交瘤的筛选和鉴定 | 第104页 |
| 7.1.8 单克隆抗体制备 | 第104页 |
| 7.1.9 改构马赛克Cap蛋白单克隆抗体的鉴定 | 第104-106页 |
| 7.1.10 改构马赛克Cap蛋白单克隆抗体的纯化 | 第106页 |
| 7.1.11 改构马赛克Cap蛋白单克隆抗体的亲和力测定 | 第106页 |
| 7.2 结果 | 第106-111页 |
| 7.2.1 改构马赛克Cap蛋白的纯化 | 第106-107页 |
| 7.2.2 阳性细胞株的筛选 | 第107页 |
| 7.2.3 改构马赛克Cap蛋白单克隆抗体的鉴定 | 第107-110页 |
| 7.2.4 改构马赛克Cap蛋白单克隆抗体的纯化 | 第110-111页 |
| 7.2.5 改构马赛克Cap蛋白单克隆抗体的亲和力测定 | 第111页 |
| 7.3 讨论 | 第111-113页 |
| 第八章 猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用 | 第113-128页 |
| 8.1 材料与方法 | 第113-118页 |
| 8.1.1 主要试剂 | 第113-114页 |
| 8.1.2 主要仪器设备 | 第114页 |
| 8.1.3 试剂盒各标准物质的制备 | 第114-116页 |
| 8.1.4 猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立 | 第116-118页 |
| 8.1.5 猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA试剂盒的评测 | 第118页 |
| 8.1.6 临床血清样品的检测 | 第118页 |
| 8.2 结果 | 第118-126页 |
| 8.2.1 猪圆环病毒2型标准阴阳性血清的鉴定 | 第118-119页 |
| 8.2.2 单抗6F8的HRP标记与验证 | 第119页 |
| 8.2.3 猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立 | 第119-123页 |
| 8.2.4 猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA试剂盒的评测 | 第123-126页 |
| 8.2.5 临床血清样品的检测 | 第126页 |
| 8.3 讨论 | 第126-128页 |
| 第九章 结论 | 第128-129页 |
| 创新点 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-139页 |
| 附录 缩略词表 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
| 个人简历 | 第142页 |
