| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 胚胎干细胞的定义和应用潜能 | 第10-11页 |
| 1.2 胚胎干细胞的体外培养及其影响因素 | 第11-17页 |
| 1.2.1 有饲养层培养体系 | 第11-12页 |
| 1.2.2 无饲养层培养体系 | 第12-17页 |
| 1.3 胚胎干细胞体外培养模式 | 第17-18页 |
| 1.3.1 静态培养 | 第17页 |
| 1.3.2 动态微载体培养 | 第17-18页 |
| 1.4 课题研究意义和研究内容 | 第18-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-27页 |
| 2.1 实验仪器与设备 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.2.1 实验细胞 | 第20页 |
| 2.2.2 细胞培养试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.3 免疫荧光染色试剂 | 第21页 |
| 2.2.4 流式细胞检测试剂 | 第21页 |
| 2.2.5 其他试剂 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.3.1 培养基的配置 | 第21-22页 |
| 2.3.2 其他实验液体的配置 | 第22页 |
| 2.3.3 MEF的制备 | 第22页 |
| 2.3.4 饲养层的制备 | 第22页 |
| 2.3.5 细胞冻存与复苏 | 第22-23页 |
| 2.3.6 mESCs的静态培养 | 第23页 |
| 2.3.7 mESCs的悬浮培养 | 第23页 |
| 2.3.8 细胞计数与细胞活性检测 | 第23页 |
| 2.3.9 免疫荧光法检测Oct4表达 | 第23页 |
| 2.3.10 碱性磷酸酶(AKP)染色 | 第23-24页 |
| 2.3.11 SSEA-1~+细胞比例分析 | 第24页 |
| 2.3.12 细胞周期分析 | 第24页 |
| 2.3.13 RT-PCR法检测mESCs转录因子的表达 | 第24-25页 |
| 2.3.14 BCA法测蛋白浓度 | 第25-26页 |
| 2.3.15 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第26页 |
| 2.3.16 统计学分析 | 第26-27页 |
| 第3章 饲养层制备方法对胚胎干细胞扩增特性的影响 | 第27-32页 |
| 3.1 饲养层制备方法对mESCs扩增特性的影响 | 第27-30页 |
| 3.2 无饲养层培养对mESCs的扩增特性的影响 | 第30-31页 |
| 3.3 本章小结 | 第31-32页 |
| 第4章 血清对胚胎干细胞扩增特性的影响 | 第32-39页 |
| 4.1 血清浓度对mESCs扩增特性的影响 | 第32-33页 |
| 4.2 SR对mESCs扩增特性的影响 | 第33-36页 |
| 4.3 SR成分分析 | 第36页 |
| 4.4 BSA对mESCs扩增特性的影响 | 第36-38页 |
| 4.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第5章 抑制剂的添加对胚胎干细胞扩增特性的影响 | 第39-66页 |
| 5.1 GSK3抑制剂的添加对mESCs扩增特性的影响 | 第39-43页 |
| 5.1.1 BIO的添加对mESCs扩增特性的影响 | 第39-41页 |
| 5.1.2 SB-216763的添加对mESCs扩增特性的影响 | 第41-43页 |
| 5.2 MEK抑制剂的添加对mESCs扩增特性的影响 | 第43-46页 |
| 5.2.1 PD184352的添加对mESCs扩增特性的影响 | 第43-44页 |
| 5.2.2 PD0325901的添加对mESCs扩增特性的影响 | 第44-46页 |
| 5.3 FGFR抑制剂SU5402的添加对mESCs扩增特性的影响 | 第46-47页 |
| 5.4 两种抑制剂的组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第47-57页 |
| 5.4.1 BIO与PD184352组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第47-49页 |
| 5.4.2 BIO与PD0325901组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第49-51页 |
| 5.4.3 BIO与SU5402组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第51-53页 |
| 5.4.4 SB-216763与PD184352组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第53-54页 |
| 5.4.5 SB与PD0325901组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第54-56页 |
| 5.4.6 SB与SU5402组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第56-57页 |
| 5.5 三种抑制剂的组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第57-64页 |
| 5.5.1 BIO、PD184352、SU5402组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第58-59页 |
| 5.5.2 BIO、PD0325901、SU5402组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第59-61页 |
| 5.5.3 SB、PD184352、SU540组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第61-62页 |
| 5.5.4 SB、PD0325901、SU540组合添加对mESCs扩增特性的影响 | 第62-64页 |
| 5.6 抑制剂作用总结 | 第64-65页 |
| 5.7 本章小结 | 第65-66页 |
| 第6章 胚胎干细胞无血清微载体培养体系的建立 | 第66-71页 |
| 6.1 微载体筛选 | 第66-68页 |
| 6.2 mESCs的在Cytodex3上的动态培养 | 第68-70页 |
| 6.3 本章小结 | 第70-71页 |
| 第7章 全文总结与展望 | 第71-73页 |
| 7.1 全文总结 | 第71-72页 |
| 7.2 展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
