引言 | 第6-8页 |
1 实验材料与材料制备 | 第8-21页 |
1.1 实验动物 | 第8页 |
1.2 实验试剂及配制 | 第8-11页 |
1.2.1 主要药品与试剂 | 第8-10页 |
1.2.2 主要试剂配制方法 | 第10-11页 |
1.3 实验仪器及材料制备 | 第11-13页 |
1.3.1 主要实验仪器 | 第11-12页 |
1.3.2 主要材料及制备 | 第12-13页 |
1.4 实验方法 | 第13-20页 |
1.4.1 大鼠颈静脉插管手术 | 第13页 |
1.4.2 稳定的海洛因自身给药模型的建立 | 第13-14页 |
1.4.3 消退实验 | 第14页 |
1.4.4 海洛因线索诱导的复吸行为测试 | 第14页 |
1.4.5 脑立体定位及大鼠伏隔核脑区微注射病毒载体 | 第14-15页 |
1.4.6 大鼠灌流取脑、切片并鉴定病毒转染情况 | 第15页 |
1.4.7 蛋白提取、浓度测定及Western Blot实验 | 第15-16页 |
1.4.8 在线数据库预测及筛选ERK相关rno-miRNA | 第16-17页 |
1.4.9 伏隔核脑区组织总RNA提取实验 | 第17页 |
1.4.10 逆转录及q RT-PCR实验 | 第17-19页 |
1.4.11 双荧光素酶报告基因实验 | 第19-20页 |
1.5 数据统计及分析 | 第20-21页 |
2 实验安排 | 第21-24页 |
2.1 明确ERK蛋白在海洛因成瘾和复吸中的表达水平变化 | 第21页 |
2.2 模型大鼠腹腔注射ERK抑制剂U0126对海洛因复吸行为及ERK蛋白表达的影响 | 第21页 |
2.3 预测并筛选调控ERK基因的目标rno-miRNA | 第21页 |
2.4 分子和细胞水平验证目标rno-miRNA | 第21-22页 |
2.4.1 q RT-PCR验证 | 第21-22页 |
2.4.2 双荧光素酶报告基因验证 | 第22页 |
2.5 模型大鼠伏隔核脑区微注射抑制rno-miR215p和过表达rno-miR-320-3p慢病毒对海洛因复吸行为及ERK蛋白表达的影响 | 第22-23页 |
2.5.1 抑制rno-miR215p的影响 | 第22页 |
2.5.2 过表达rno-miR3203p的影响 | 第22-23页 |
2.6 模型大鼠伏隔核脑区过表达siRNA-ERK对海洛因复吸行为及ERK蛋白表达的影响 | 第23-24页 |
3 实验结果 | 第24-41页 |
3.1 明确ERK蛋白在海洛因成瘾和复吸中的表达水平变化 | 第24-26页 |
3.1.1 建立稳定自身给药模型 | 第24页 |
3.1.2 线索诱导复吸行为测试 | 第24-25页 |
3.1.3 明确海洛因自身给药戒断后线索诱导复吸大鼠ERK蛋白表达情况 | 第25-26页 |
3.2 模型大鼠腹腔注射ERK抑制剂U0126对海洛因复吸行为及ERK蛋白表达的影响 | 第26-28页 |
3.2.1 腹腔注射ERK抑制剂U0126对海洛因复吸行为影响 | 第26-27页 |
3.2.2 腹腔注射ERK抑制剂U0126对ERK蛋白表达的影响 | 第27-28页 |
3.3 调控ERK基因的目标miRNA的预测和筛选 | 第28页 |
3.3.1 目标rno-miRNA的预测 | 第28页 |
3.3.2 目标rno-miRNA的筛选 | 第28页 |
3.4 分子和细胞水平验证目标miRNA | 第28-32页 |
3.4.1 q RT-PCR验证 | 第28-30页 |
3.4.2 双荧光素酶报告基因验证 | 第30-32页 |
3.5 模型大鼠伏隔核脑区过表达或抑制目标rno-miRNA对海洛因复吸行为及ERK蛋白表达的影响 | 第32-39页 |
3.5.1 大鼠灌流取脑、切片并观察病毒转染情况 | 第32-33页 |
3.5.2 抑制rno-miR215p对海洛因复吸行为及ERK蛋白表达的影响 | 第33-36页 |
3.5.3 过表达rno-miR3203p对海洛因复吸行为及ERK蛋白表达的影响 | 第36-39页 |
3.6 模型大鼠伏隔核脑区过表达siRNA-ERK对海洛因复吸行为及ERK蛋白表达的影响 | 第39-41页 |
3.6.1 过表达siRNA-ERK对海洛因复吸行为影响 | 第39-40页 |
3.6.2 过表达siRNA-ERK对ERK2 mRNA及蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
4 讨论 | 第41-44页 |
5 结论 | 第44-46页 |
参考文献 | 第46-50页 |
附录A 缩写词及中英文对照表 | 第50-51页 |
附录B 文献综述 | 第51-68页 |
参考文献 | 第59-68页 |
在学研究成果 | 第68-69页 |
致谢 | 第69-70页 |
论文摘要 | 第70-71页 |
Abstract | 第71-72页 |