| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 灰霉病的发生状况 | 第11-12页 |
| 1.2 灰葡萄孢致病分子机制研究进展 | 第12-16页 |
| 1.3 分泌系统exocyst复合体的研究进展 | 第16-18页 |
| 第二章 灰葡萄孢突变体的构建与鉴定 | 第18-44页 |
| 2.1 材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 载体 | 第18页 |
| 2.1.3 主要供试试剂及仪器 | 第18-21页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-37页 |
| 2.2.1 农杆菌AGL-1感受态细胞制备及转化 | 第21-22页 |
| 2.2.2 农杆菌介导的灰霉转化 | 第22-23页 |
| 2.2.3 转化子基因组DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第24-25页 |
| 2.2.5 转化子的PCR分子鉴定 | 第25页 |
| 2.2.6 Southern blot分析T-DNA插入模式 | 第25-29页 |
| 2.2.7 转化子中T-DNA插入位点侧翼序列的克隆 | 第29-34页 |
| 2.2.8 转化子单异核鉴定 | 第34页 |
| 2.2.9 RT-PCR检测T-DNA插入的基因是否表达 | 第34-37页 |
| 2.3 结果与分析 | 第37-42页 |
| 2.3.1 灰葡萄孢转化子获得以及抗性稳定性检测 | 第37-38页 |
| 2.3.2 ΔBcsec5潮霉素抗性基因PCR鉴定显示阳性 | 第38页 |
| 2.3.3 Southern blot显示T-DNA为单拷贝插入 | 第38-40页 |
| 2.3.4 T-DNA旁侧序列分析 | 第40-41页 |
| 2.3.5 获得单核转化子 | 第41-42页 |
| 2.3.6 RT-PCR显示T-DNA插入的基因未表达 | 第42页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 灰葡萄孢sec5突变体ΔBcsec5的生物学性状分析 | 第44-54页 |
| 3.1 材料 | 第44页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第44页 |
| 3.1.2 主要供试试剂和仪器 | 第44页 |
| 3.2 方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 突变体ΔBcsec5的生物学表型鉴定 | 第44-46页 |
| 3.2.2 突变体ΔBcsec5的致病力测定 | 第46-47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-53页 |
| 3.3.1 突变体ΔBcsec5的生物学表型 | 第47-51页 |
| 3.3.2 突变体ΔBcsec5的致病力 | 第51-53页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 突变体遗传互补和标记基因的功能研究 | 第54-67页 |
| 4.1 材料 | 第54页 |
| 4.1.1 供试菌株与载体 | 第54页 |
| 4.1.2 供试试剂和仪器 | 第54页 |
| 4.2 方法 | 第54-58页 |
| 4.2.1 灰葡萄孢SEC5基因克隆、入门载体pETHG-SEC5的构建 | 第54-55页 |
| 4.2.2 构建互补表达载体pCAMBIA-Bar-SEC5 | 第55-56页 |
| 4.2.3 突变体互补转化子的获得、鉴定及表型分析 | 第56-57页 |
| 4.2.4 Sec5与GFP融合蛋白表达载体pGWB505-SEC5的构建 | 第57页 |
| 4.2.5 Sec5与GFP融合蛋白的细胞定位观察 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-65页 |
| 4.3.1 灰葡萄孢SEC5基因的克隆与入门载体构建 | 第58-59页 |
| 4.3.2 构建pCAMBIA-Bar-SEC5质粒 | 第59-60页 |
| 4.3.3 互补转化子的获得、鉴定及表型分析 | 第60-62页 |
| 4.3.4 构建pGWB505-SEC5质粒 | 第62-65页 |
| 4.3.5 Sec5与GFP融合蛋白的细胞定位观察 | 第65页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第76页 |
