| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语(Abbrevation) | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 鸭IgY分子的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 IgY分子概述 | 第13页 |
| 1.1.2 IgY基因的结构和表达 | 第13页 |
| 1.1.3 IgY分子结构 | 第13-14页 |
| 1.1.4 IgY进化研究 | 第14-15页 |
| 1.1.5 IgY分子在各类动物中的分布 | 第15页 |
| 1.1.6 IgY分子的功能及应用 | 第15-16页 |
| 1.2 单克隆抗体的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 单克隆抗体的概念和基本原理 | 第16-17页 |
| 1.2.2 单克隆抗体技术的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.3 单克隆抗体的应用进展 | 第18-19页 |
| 1.3 鸭疫里氏杆菌的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 鸭疫里氏杆菌概述 | 第19-20页 |
| 1.3.2 鸭疫里氏杆菌诊断方法的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 胶体金免疫层析技术 | 第21-23页 |
| 1.4.1 胶体金免疫层析检测试纸条的组成 | 第21-22页 |
| 1.4.2 胶体金免疫层析试纸条检测抗体的原理 | 第22页 |
| 1.4.3 胶体金免疫层析技术的应用现状及优势 | 第22-23页 |
| 2 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第24-31页 |
| 3.1.1 载体及菌株 | 第24-25页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.3 实验动物 | 第26页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第26页 |
| 3.1.5 试剂配制 | 第26-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-42页 |
| 3.2.1 鸭IgYFc CH2基因片段的亚克隆 | 第31-34页 |
| 3.2.2 重组原核表达质粒的诱导表达 | 第34-35页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE电泳 | 第35页 |
| 3.2.4 表达产物可溶性检测 | 第35页 |
| 3.2.5 融合蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.6 融合蛋白的Western blot鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.7 小鼠免疫以及血清效价的检测 | 第37-38页 |
| 3.2.8 SP2/0骨髓瘤的准备 | 第38页 |
| 3.2.9 饲养细胞的制备 | 第38-39页 |
| 3.2.10 免疫脾细胞的制备 | 第39页 |
| 3.2.11 细胞融合 | 第39页 |
| 3.2.12 杂交瘤细胞的选择性培养与克隆 | 第39-41页 |
| 3.2.13 小鼠腹水法生产单克隆抗体 | 第41页 |
| 3.2.14 腹水的纯化 | 第41-42页 |
| 3.2.15 单克隆抗体的鉴定 | 第42页 |
| 3.3 Ⅰ型鸭疫里氏杆菌感染的抗体胶体金免疫层析检测试纸条的制备与初步应用 | 第42-47页 |
| 3.3.1 | 第43页 |
| 3.3.2 胶体金标记抗IgY Fc CH3CH4片段单克隆抗体的制备 | 第43-46页 |
| 3.3.3 鸭疫里氏杆菌快速检测试纸条的性能检测 | 第46-47页 |
| 3.3.4 鸭疫里氏杆菌快速检测试纸条的初步应用 | 第47页 |
| 4 实验结果 | 第47-68页 |
| 4.1 鸭IgY Fc CH2基因片段的重组质粒构建 | 第47-48页 |
| 4.1.1 鸭IgY Fc CH2基因片段的亚克隆 | 第47-48页 |
| 4.1.2 pGEX-KG-CH2重组质粒的构建 | 第48页 |
| 4.2 GST-CH2蛋白的SDS-PAGE以及Western blot鉴定 | 第48-50页 |
| 4.3 抗鸭IgY Fc CH2片段的单克隆抗体的制备 | 第50-54页 |
| 4.3.1 免疫小鼠血清效价的检测 | 第50-51页 |
| 4.3.2 杂交瘤细胞株的筛选 | 第51页 |
| 4.3.3 单克隆抗体的纯化以及鉴定 | 第51-53页 |
| 4.3.4 单克隆抗体2F的特异性鉴定 | 第53-54页 |
| 4.4 抗鸭IgY Fc CH3CH4的单克隆抗体的制备 | 第54-55页 |
| 4.4.1 鸭IgY Fc CH1CH4、CH3CH4基因片段的重组质粒构建 | 第54-55页 |
| 4.5 GST-CH1CH4/His-CH3CH4蛋白的SDS-PAGE以及Western blot鉴定 | 第55-56页 |
| 4.6 抗鸭IgY Fc CH3CH4片段的单克隆抗体的制备 | 第56-59页 |
| 4.6.1 免疫小鼠血清效价的检测 | 第56页 |
| 4.6.2 杂交瘤细胞株的筛选 | 第56-57页 |
| 4.6.3 单克隆抗体的纯化以及鉴定 | 第57-59页 |
| 4.7 鸭疫里氏杆菌IVE-2蛋白的获得 | 第59-61页 |
| 4.7.1 ive-2基因片段的亚克隆 | 第59页 |
| 4.7.2 pGEX-KG-ive-2重组质粒的构建 | 第59-60页 |
| 4.7.3 GST-IVE-2蛋白的SDS-PAGE以及Western blot鉴定 | 第60-61页 |
| 4.7.4 RAⅡ型和未定型菌株中的ive-2基因的扩增 | 第61页 |
| 4.8 鸭疫里氏杆菌胶体金免疫层析检测试纸条的制备与初步应用 | 第61-68页 |
| 4.8.1 胶体金的制备 | 第61-62页 |
| 4.8.2 鸭疫里氏杆菌胶体金免疫层析检测试纸条组装条件确定 | 第62-65页 |
| 4.8.3 胶体金试纸条的特异性试验 | 第65-66页 |
| 4.8.4 胶体金试纸条的敏感性试验 | 第66-67页 |
| 4.8.5 胶体金试纸条的初步应用 | 第67-68页 |
| 5 讨论 | 第68-70页 |
| 5.1 单克隆抗体的获得 | 第68-69页 |
| 5.1.1 免疫程序的选择和调整 | 第68页 |
| 5.1.2 腹水纯化方法的选择 | 第68-69页 |
| 5.2 抗IgY Fc CH2片段单抗与鸭、鸡血清通过ELISA检测无结果的原因分析 | 第69页 |
| 5.3 抗鸭IgY Fc CH3CH4片段单抗的特异性分析 | 第69页 |
| 5.4 金标单克隆抗体的选择 | 第69-70页 |
| 5.5 所建立的鸭疫里氏杆菌感染诊断试纸条的应用 | 第70页 |
| 6 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
