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重组血管活性肠肽克隆构建及其生物活性测定

缩略词表第7-8页
中文摘要第8-9页
Abstract第9页
第一部分 文献综述第10-20页
    1.1 血管活性肠肽简介第10-11页
        1.1.1 血管活性肠肽的结构第10-11页
        1.1.2 血管活性肠肽的来源第11页
        1.1.3 血管活性肠肽在体内的分布第11页
    1.2 血管活性肠肽的受体第11-12页
    1.3 血管活性肠肽的生物学功能第12-13页
        1.3.1 血管活性肠肽的胃肠道激素功能第12页
        1.3.2 血管活性肠肽的神经肽功能第12页
        1.3.3 血管活性肠肽的免疫功能第12-13页
    1.4 血管活性肠肽的主要生理作用第13-16页
        1.4.1 血管活性肠肽对胃肠道的作用第13页
        1.4.2 血管活性肠肽对心血管系统的作用第13页
        1.4.3 血管活性肠肽对肿瘤生长的影响第13-14页
        1.4.4 血管活性肠肽对于免疫的影响第14-16页
            1.4.4.1 血管活性肠肽在免疫细胞的表达和内源性VIP的作用第14页
            1.4.4.2 血管活性肠肽在炎症和自身免疫性疾病中的作用第14-15页
            1.4.4.3 血管活性肠肽在炎症和自身免疫疾病方面的应用第15-16页
    1.5 血清抵抗素(Resistin)第16-18页
        1.5.1 血清抵抗素第16页
        1.5.2 血清抵抗素的表达调控第16页
        1.5.3 血清抵抗素与胰岛素抵抗第16-17页
        1.5.4 血清抵抗素与炎症第17页
        1.5.5 血清抵抗素与高血压第17页
        1.5.6 血清抵抗素与动脉粥样硬化第17-18页
        1.5.7 血管活性肠肽对血清抵抗素的作用第18页
    1.6 课题的提出第18-20页
第二部分 重组血管活性肠肽克隆的构建及表达第20-42页
    2.1 实验材料第20-25页
        2.1.1 实验仪器第20页
        2.1.2 实验材料第20-23页
        2.1.3 主要试剂第23-24页
        2.1.4 主要溶液的配置第24-25页
    2.2 实验方法第25-33页
        2.2.1 实验流程第25-27页
        2.2.2 大肠杆菌TOP10感受态的制备第27-29页
        2.2.3 HSA片段的制备第29-30页
        2.2.4 载体pcDNA3.1的制备第30页
        2.2.5 定量第30页
        2.2.6 连接第30-31页
        2.2.7 转化第31页
        2.2.8 菌液PCR筛选第31页
        2.2.9 阳性克隆的保存与质粒DNA小量提取第31-32页
        2.2.10 阳性克隆质粒酶切鉴定第32页
        2.2.11 阳性克隆的DNA测序第32页
        2.2.12 重组VIP蛋白在CHO细胞的表达第32-33页
    2.3 实验结果第33-40页
        2.3.1 VIP片段的制备第33-35页
        2.3.2 HSA片段的制备第35-36页
        2.3.3 pcDNA3.1载体的制备及定量第36-37页
        2.3.4 重组VIP表达载体的连接与转化第37页
        2.3.5 阳性克隆的菌液PCR筛选第37-38页
        2.3.6 阳性克隆的质粒DNA提取第38-39页
        2.3.7 阳性克隆的质粒酶切鉴定第39页
        2.3.8 阳性克隆的DNA序列分析第39-40页
        2.3.9 重组VIP蛋白的CHO细胞表达第40页
    2.4 讨论第40-42页
第三部分 重组血管活性肠肽抗炎活性测定第42-50页
    3.1 实验材料第42-43页
        3.1.1 实验仪器第42页
        3.1.2 实验材料第42页
        3.1.3 主要溶液的配置第42-43页
    3.2 实验方法第43-44页
        3.2.1 小鼠的分组及给药方式第43页
        3.2.2 小鼠血清的收集第43页
        3.2.3 小鼠血清抵抗素(resistin)的ELISA检测第43-44页
    3.3 实验结果第44-47页
        3.3.1 小鼠血清抵抗素ELISA检测结果第44-47页
        3.3.2 小鼠行为学观察结果第47页
    3.4 讨论第47-50页
第四部分 结论第50-51页
    4.1 实验结论第50页
    4.2 展望第50-51页
参考文献第51-58页
致谢第58页

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