| 提要 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 英文缩写词表 | 第22-24页 |
| 引言 | 第24-26页 |
| 第一篇 文献综述 | 第26-54页 |
| 1. CTLA-4概述 | 第26-31页 |
| 1.1 CTLA-4的基因结构及多态性 | 第26-27页 |
| 1.2 CTLA-4的表达调控 | 第27-29页 |
| 1.3 CTLA-4的蛋白结构 | 第29-30页 |
| 1.4 CTLA-4的配体 | 第30-31页 |
| 2. CTLA-4发挥免疫抑制作用的机制 | 第31-36页 |
| 2.1 CTLA-4的共抑制作用传统模型 | 第32-33页 |
| 2.2 CTLA-4的细胞外功能 | 第33-34页 |
| 2.3 CTLA-4在Treg中的作用 | 第34-35页 |
| 2.4 CTLA-4与抗原提呈细胞的表型修饰 | 第35-36页 |
| 2.5 CTLA-4与滤泡辅助性T细胞 | 第36页 |
| 3. 以CTLA-4为靶点的药物研究进展 | 第36-39页 |
| 3.1 CTLA4Ig融合蛋白 | 第37-38页 |
| 3.2 抗CTLA-4抗体 | 第38-39页 |
| 4. 佐剂的研究现状 | 第39-47页 |
| 4.1 佐剂的分类 | 第40-44页 |
| 4.1.1 免疫调节分子 | 第40-42页 |
| 4.1.2 递送系统 | 第42-44页 |
| 4.1.3 兼具免疫调节和递送功能的混合佐剂 | 第44页 |
| 4.2 佐剂的功能 | 第44-46页 |
| 4.2.1 降低抗原剂量 | 第45页 |
| 4.2.2 引发迅速的免疫反应 | 第45-46页 |
| 4.2.3 拓宽抗体应答 | 第46页 |
| 4.2.4 调控抗体应答的强度和功能性 | 第46页 |
| 4.2.5 诱导有效的T细胞应答 | 第46页 |
| 4.3 佐剂发挥作用的机制 | 第46-47页 |
| 5. RNA靶向性寡核苷酸的作用机制、化学修饰及应用 | 第47-54页 |
| 5.1 RNA靶向性寡核苷酸的分类及作用机制 | 第47-50页 |
| 5.1.1 ASO | 第48页 |
| 5.1.2 siRNA与miRNA | 第48-49页 |
| 5.1.3 位阻寡核苷酸 | 第49-50页 |
| 5.2 RNA靶向性寡核苷酸的化学修饰 | 第50-51页 |
| 5.3 RNA靶向性寡核苷酸的应用 | 第51-54页 |
| 第二篇 研究内容 | 第54-148页 |
| 第一章 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN的设计、筛选及鉴定 | 第54-74页 |
| 1. 实验材料 | 第54-55页 |
| 1.1 实验试剂 | 第54-55页 |
| 1.1.1 ODN | 第54页 |
| 1.1.2 其他试剂 | 第54-55页 |
| 1.2 实验器材 | 第55页 |
| 1.2.1 主要仪器 | 第55页 |
| 1.2.2 其他小型仪器及耗材 | 第55页 |
| 2. 实验方法 | 第55-59页 |
| 2.1 人和小鼠CTLA-4 mRNA 3'UTR序列信息的获取 | 第55页 |
| 2.2 人和小鼠CTLA-4 mRNA 3'UTR保守序列的筛选 | 第55-56页 |
| 2.3 人和小鼠CTLA-4 mRNA 3'UTR保守序列的二级结构预测33 | 第56页 |
| 2.4 人和小鼠CTLA-4 mRNA 3'UTR保守序列内部稳定性分析 | 第56页 |
| 2.5 ODN的二级结构预测和分子间/分子内能量分析 | 第56-57页 |
| 2.6 ODN与靶区mRNA结合的能量分析 | 第57页 |
| 2.7 ODN的评分 | 第57页 |
| 2.8 ODN的特异性分析 | 第57页 |
| 2.9 ODN的合成 | 第57-58页 |
| 2.10 ODN的鉴定 | 第58页 |
| 2.11 ODN的稳定性检测 | 第58-59页 |
| 3. 结果 | 第59-70页 |
| 3.1 人和小鼠CTLA-4 mRNA 3'UTR保守序列的筛选及评估 | 第59-62页 |
| 3.1.1 人和小鼠CTLA-4 mRNA 3'UTR保守序列的筛选 | 第59-60页 |
| 3.1.2 人和小鼠CTLA-4 mRNA 3'UTR保守序列的评估 | 第60-62页 |
| 3.2 CTLA-4 mRNA 3'UTR潜在靶点的确定及候选靶向性ODN的设计 | 第62-63页 |
| 3.3 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN的筛选及评估 | 第63-68页 |
| 3.3.1 CTLA-4 mRNA 3'UTR候选靶向性ODN的二级结构预测 | 第63-64页 |
| 3.3.2 CTLA-4 mRNA 3'UTR候选靶向性ODN的能量特性分析 | 第64-65页 |
| 3.3.3 CTLA-4 mRNA 3'UTR候选靶向性ODN的评分 | 第65-66页 |
| 3.3.4 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN的特异性评价 | 第66-68页 |
| 3.4 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN的合成与鉴定 | 第68-70页 |
| 3.4.1 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN的合成 | 第68-69页 |
| 3.4.2 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN的鉴定 | 第69页 |
| 3.4.3 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN的稳定性检测 | 第69-70页 |
| 4. 讨论 | 第70-73页 |
| 5. 小结 | 第73-74页 |
| 第二章 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN对CTLA-4抑制作用的研究 | 第74-108页 |
| 1. 实验材料 | 第74-76页 |
| 1.1 实验试剂 | 第74-76页 |
| 1.1.1 ODN | 第74页 |
| 1.1.2 引物 | 第74-75页 |
| 1.1.3 实验动物 | 第75页 |
| 1.1.4 菌种及重组蛋白 | 第75页 |
| 1.1.5 其他试剂 | 第75-76页 |
| 1.2 实验器材 | 第76页 |
| 2. 实验方法 | 第76-87页 |
| 2.1 小鼠外周血/脾/淋巴结及人外周血细胞的分离 | 第76-77页 |
| 2.1.1 小鼠外周血细胞的分离 | 第76-77页 |
| 2.1.2 小鼠脾细胞的分离 | 第77页 |
| 2.1.3 小鼠淋巴结细胞的分离 | 第77页 |
| 2.1.4 人外周血细胞的分离 | 第77页 |
| 2.2 ODN进入靶细胞的动力学分析 | 第77-79页 |
| 2.2.1 流式细胞术检测ODN在体外进入CD4~+ T细胞的效率 | 第77-78页 |
| 2.2.2 免疫荧光检测ODN在CD4~+ T细胞内部的运动情况 | 第78页 |
| 2.2.3 流式细胞术检测肌肉注射的ODN在小鼠体内的分布情况 | 第78-79页 |
| 2.2.4 ODN在小鼠体内进入CD4~+ T细胞的效率 | 第79页 |
| 2.3 Cp免疫的小鼠的脾细胞制备 | 第79页 |
| 2.4 流式细胞术检测ODN对CTLA-4表达的影响 | 第79-80页 |
| 2.5 实时定量PCR检测ODN在细胞内对CTLA-4 mRNA的作用 | 第80-82页 |
| 2.5.1 细胞的处理 | 第80页 |
| 2.5.2 总RNA的提取 | 第80-81页 |
| 2.5.3 逆转录获取cDNA | 第81页 |
| 2.5.4 RT-PCR检测mRNA水平 | 第81-82页 |
| 2.6 CTLA-4 mRNA的制备 | 第82-86页 |
| 2.6.1 编码CTLA-4 mRNA的基因的调取 | 第82-83页 |
| 2.6.2 CTLA-4 mRNA基因与T载体连接 | 第83-84页 |
| 2.6.3 CTLA-4 mRNA基因与pc DNA3载体连接 | 第84-85页 |
| 2.6.4 PCR法扩增体外转录模板 | 第85-86页 |
| 2.6.5 体外转录获取CTLA-4 mRNA | 第86页 |
| 2.7 RNase H切割活性分析 | 第86-87页 |
| 2.8 统计学分析 | 第87页 |
| 3. 结果 | 第87-103页 |
| 3.1 CMD-1及CMD-2进入靶细胞的动力学分析 | 第87-92页 |
| 3.1.1 CMD-1及CMD-2在体外进入CD4~+ T细胞的效率分析 | 第87-88页 |
| 3.1.2 CMD-1及CMD-2在CD4~+ T细胞内部的动力学分析65 | 第88-90页 |
| 3.1.3 通过肌肉注射的CMD-1及CMD-2在小鼠体内的分布情况 | 第90-91页 |
| 3.1.4 CMD-1及CMD-2在小鼠体内进入CD4~+ T细胞的效率 | 第91-92页 |
| 3.2 CMD-1及CMD-2对CTLA-4表达的影响 | 第92-97页 |
| 3.2.1 CMD-1及CMD-2对小鼠CTLA-4表达的影响 | 第92-96页 |
| 3.2.2 CMD-1及CMD-2对人CTLA-4表达的影响 | 第96-97页 |
| 3.3 CMD-1及CMD-2对CTLA-4 mRNA的作用 | 第97-103页 |
| 3.3.1 CMD-1及CMD-2在细胞内对CTLA-4 mRNA的作用75 | 第98-99页 |
| 3.3.2 CMD-1及CMD-2与CTLA-4 mRNA作用机制的研究 | 第99-103页 |
| 4. 讨论 | 第103-107页 |
| 5. 小结 | 第107-108页 |
| 第三章 CTLA-4 mRNA 3'UTR靶向性ODN的佐剂效应研究 | 第108-148页 |
| 1 实验材料 | 第108-110页 |
| 1.1 实验试剂 | 第108-110页 |
| 1.1.1 ODNs | 第108页 |
| 1.1.2 引物 | 第108-109页 |
| 1.1.3 实验动物 | 第109页 |
| 1.1.4 菌种及细胞 | 第109页 |
| 1.1.5 病毒及重组蛋白 | 第109页 |
| 1.1.6 其他试剂 | 第109-110页 |
| 1.2 实验器材 | 第110页 |
| 2 实验方法 | 第110-122页 |
| 2.1 CPAC VLPs表达、纯化及鉴定 | 第110-116页 |
| 2.1.1 重组Bacmid的构建 | 第111-114页 |
| 2.1.2 重组CPAC蛋白的表达 | 第114-115页 |
| 2.1.3 重组CPAC蛋白的纯化 | 第115页 |
| 2.1.4 CPAC VLPs的结构鉴定 | 第115-116页 |
| 2.1.5 CPAC VLPs的抗原性鉴定 | 第116页 |
| 2.2 疫苗的配制 | 第116-117页 |
| 2.2.1 灭活FMDV疫苗的配制 | 第116页 |
| 2.2.2 重组CPAC VLPs疫苗的配制 | 第116-117页 |
| 2.2.3 无乳化剂重组CPAC VLPs疫苗的配制 | 第117页 |
| 2.3 实验动物分组及免疫 | 第117-118页 |
| 2.3.1 ODNs作为灭活病毒疫苗佐剂对抗体产生水平的影响 | 第117页 |
| 2.3.2 ODNs作为重组CPAC VLPs疫苗佐剂对抗体产生水平的影响 | 第117-118页 |
| 2.3.3 小鼠品系对ODNs佐剂效应的影响 | 第118页 |
| 2.3.4 剂型对ODNs佐剂效应的影响 | 第118页 |
| 2.3.5 剂量对ODNs佐剂效应的影响 | 第118页 |
| 2.4 小鼠尾静脉采血及血清分离 | 第118-119页 |
| 2.5 抗体水平的检测 | 第119页 |
| 2.6 ODN在体内对免疫细胞影响的检测 | 第119-120页 |
| 2.7 ODN在体外对CD11c~+表面CD80/CD86影响的检测 | 第120页 |
| 2.8 ODN在体外对CD4~+ T或CD19~+ B细胞增殖影响的检测 | 第120-121页 |
| 2.9 ODN在体外对CD4~+ T细胞表达IL-4影响的检测 | 第121页 |
| 2.10 统计学分析 | 第121-122页 |
| 3. 结果 | 第122-142页 |
| 3.1 CMD-1在体内对抗体水平产生的影响 | 第122-132页 |
| 3.1.1 CMD-1作为灭活病毒疫苗佐剂对抗体产生水平的影响 | 第122-123页 |
| 3.1.2 CMD-1作为重组亚单位疫苗佐剂对抗体产生水平的影响 | 第123-129页 |
| 3.1.3 小鼠品系对CMD-1佐剂效应的影响 | 第129-130页 |
| 3.1.4 剂型对CMD-1及CMD-2佐剂效应的影响 | 第130-131页 |
| 3.1.5 CMD-1的剂量对其佐剂效应的影响 | 第131-132页 |
| 3.2 CMD-1在体内对免疫细胞的影响 | 第132-136页 |
| 3.2.1 CMD-1在小鼠体内对CD4~+ T细胞的影响 | 第132-133页 |
| 3.2.2 CMD-1在小鼠体内对CD4~+ T细胞表面CTLA-4的影响 | 第133-134页 |
| 3.2.3 CMD-1在小鼠体内对CD11c~+细胞表面CD80的影响 | 第134-135页 |
| 3.2.4 CMD-1在小鼠体内对CD19~+ B细胞的影响 | 第135-136页 |
| 3.3 CMD-1发挥佐剂效应机制的研究 | 第136-142页 |
| 3.3.1 CMD-1在体外对CD11c~+细胞表面CD80和CD86的影响 | 第136-138页 |
| 3.3.2 CMD-1在体外对CD4~+ T细胞活化增殖能力的影响 | 第138-139页 |
| 3.3.3 CMD-1在体外对CD19+ B细胞活化增殖能力的影响 | 第139-140页 |
| 3.3.4 CMD-1在体外对CD4~+ T细胞表达的IL-4的影响 | 第140-142页 |
| 4. 讨论 | 第142-145页 |
| 5. 小结 | 第145-148页 |
| 结论 | 第148-150页 |
| 创新点 | 第150-152页 |
| 参考文献 | 第152-176页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第176-178页 |
| 致谢 | 第178-180页 |
| 附录 | 第180-181页 |
