| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-31页 |
| 1.1 西洋参的资源利用 | 第13-14页 |
| 1.2 人参皂苷的研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 人参皂苷的资源利用 | 第14-15页 |
| 1.2.2 人参皂苷的生物合成途径 | 第15-18页 |
| 1.2.3 人参皂苷合成途径的关键酶 | 第18-20页 |
| 1.2.4 环境因子对人参皂苷合成途径的影响 | 第20页 |
| 1.3 糖基转移酶的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 糖基转移酶的特征和分类 | 第20-22页 |
| 1.3.2 糖基转移酶的生物学功能 | 第22-23页 |
| 1.4 植物启动子的研究进展 | 第23-28页 |
| 1.4.1 植物启动子的结构特点 | 第23页 |
| 1.4.2 植物启动子的分类 | 第23-25页 |
| 1.4.3 植物启动子的研究方法 | 第25-28页 |
| 1.5 本研究的目的意义与技术路线 | 第28-31页 |
| 1.5.1 研究的目的意义 | 第28-29页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第29-31页 |
| 第2章 UDP-葡萄糖基转移酶基因Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2的克隆 | 第31-53页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 材料和仪器 | 第31-34页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-40页 |
| 2.3.1 西洋参总RNA的获得 | 第34-35页 |
| 2.3.2 两个UDP-葡萄糖基转移酶基因核心片段的扩增 | 第35-38页 |
| 2.3.3 两个UDP-葡萄糖基转移酶基因cDNA全长的获得 | 第38-39页 |
| 2.3.4 两个UDP-葡萄糖基转移酶基因cDNA序列的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 2.4 结果和分析 | 第40-50页 |
| 2.4.1 Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2核心片段的扩增 | 第40-42页 |
| 2.4.2 Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2编码区全长扩增 | 第42-43页 |
| 2.4.3 Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2的氨基酸序列分析 | 第43-44页 |
| 2.4.4 Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2相关系统发育树的构建.. | 第44-47页 |
| 2.4.5 Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2的高级结构分析 | 第47-50页 |
| 2.5 讨论 | 第50-51页 |
| 2.6 本章小结 | 第51-53页 |
| 第3章 UDP-葡萄糖基转移酶基因Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2的功能鉴定 | 第53-75页 |
| 3.1 引言 | 第53页 |
| 3.2 材料和仪器 | 第53-56页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第54-56页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-62页 |
| 3.3.1 Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2两端酶切位点的添加 | 第56-57页 |
| 3.3.2 两个重组表达载体的构建 | 第57-59页 |
| 3.3.3 两个重组表达载体的筛选鉴定 | 第59页 |
| 3.3.4 两个重组表达载体的转化 | 第59-60页 |
| 3.3.5 两个重组酵母工程菌的纯化与表达 | 第60-61页 |
| 3.3.6 两个重组酵母工程菌表达产物的鉴定 | 第61-62页 |
| 3.4 结果和分析 | 第62-72页 |
| 3.4.1 Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2两端酶切位点的添加 | 第62-64页 |
| 3.4.2 两个重组表达载体的双酶切鉴定 | 第64-66页 |
| 3.4.3 两个重组酵母菌阳性菌的筛选鉴定 | 第66-67页 |
| 3.4.4 两个酵母菌表达产物的SDS-PAGE和HPLC/MS鉴定 | 第67-72页 |
| 3.5 讨论 | 第72-74页 |
| 3.6 本章小结 | 第74-75页 |
| 第4章 UDP-葡萄糖基转移酶基因Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2启动子的克隆 | 第75-101页 |
| 4.1 引言 | 第75页 |
| 4.2 材料和仪器 | 第75-77页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第75-76页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第76-77页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第77页 |
| 4.3 试验方法 | 第77-82页 |
| 4.3.1 西洋参总RNA的提取 | 第77页 |
| 4.3.2 西洋参cDNA的合成 | 第77页 |
| 4.3.3 西洋参基因组DNA的提取 | 第77-78页 |
| 4.3.4 两个UDP-葡萄糖基转移酶基因cDNA序列和基因组DNA序列的获得 | 第78页 |
| 4.3.5 Pq3-O-UGT1启动子序列的克隆 | 第78-80页 |
| 4.3.6 Pq3-O-UGT2启动子序列的克隆 | 第80-82页 |
| 4.3.7 两个启动子序列的生物信息学分析 | 第82页 |
| 4.4 结果和分析 | 第82-97页 |
| 4.4.1 西洋参基因组DNA的提取 | 第82页 |
| 4.4.2 Pq3-O-UGT1编码区基因组DNA序列的扩增 | 第82-85页 |
| 4.4.3 Pq3-O-UGT1启动子序列的扩增 | 第85-88页 |
| 4.4.4 Pq3-O-UGT1启动子序列分析 | 第88-90页 |
| 4.4.5 Pq3-O-UGT2编码区基因组DNA序列的扩增 | 第90-92页 |
| 4.4.6 Pq3-O-UGT2启动子序列的扩增 | 第92-95页 |
| 4.4.7 Pq3-O-UGT2启动子序列分析 | 第95-97页 |
| 4.5 讨论 | 第97-99页 |
| 4.6 本章小结 | 第99-101页 |
| 第5章 UDP-葡萄糖基转移酶基因Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2启动子缺失片段的活性分析 | 第101-131页 |
| 5.1 引言 | 第101页 |
| 5.2 材料和仪器 | 第101-103页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第101-102页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第102-103页 |
| 5.2.3 主要仪器设备 | 第103页 |
| 5.3 实验方法 | 第103-110页 |
| 5.3.1 Pq3-O-UGT1和Pq3-O-UGT2启动子全长和5’端缺失片段的克隆 | 第103-104页 |
| 5.3.2 6 个目的片段和pBI121载体的酶切连接 | 第104-106页 |
| 5.3.3 6 个农杆菌重组工程菌的构建 | 第106-107页 |
| 5.3.4 6 个启动子缺失片段的融合载体转化烟草 | 第107-109页 |
| 5.3.5 烟草阳性植株的筛选 | 第109页 |
| 5.3.6 GUS染色检测 | 第109-110页 |
| 5.3.7 抗性烟草的非生物胁迫 | 第110页 |
| 5.3.8 GUS酶活检测 | 第110页 |
| 5.4 结果和分析 | 第110-126页 |
| 5.4.1 Pq3-O-UGT1启动子片段的扩增 | 第110-111页 |
| 5.4.2 Pq3-O-UGT1启动子缺失片段表达载体双酶切鉴定 | 第111-112页 |
| 5.4.3 Pq3-O-UGT1启动子缺失片段表达工程菌的鉴定 | 第112-114页 |
| 5.4.4 Pq3-O-UGT1启动子缺失片段的活性分析 | 第114-116页 |
| 5.4.5 Pq3-O-UGT1启动子片段在烟草中的遗传转化 | 第116-117页 |
| 5.4.6 阳性烟草植株的鉴定 | 第117-119页 |
| 5.4.7 Pq3-O-UGT1启动子缺失片段对非生物胁迫的响应 | 第119-121页 |
| 5.4.8 Pq3-O-UGT2启动子片段的扩增 | 第121-122页 |
| 5.4.9 Pq3-O-UGT2启动子缺失片段表达载体的双酶切鉴定 | 第122-123页 |
| 5.4.10 Pq3-O-UGT2启动子缺失片段表达工程菌的鉴定 | 第123-124页 |
| 5.4.11 Pq3-O-UGT2启动子缺失片段活性分析 | 第124-126页 |
| 5.5 讨论 | 第126-128页 |
| 5.6 本章小结 | 第128-131页 |
| 第6章 结论和展望 | 第131-135页 |
| 6.1 结论 | 第131-132页 |
| 6.2 展望 | 第132-133页 |
| 6.3 创新点 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-149页 |
| 在读期间的学术成果和科研情况 | 第149-151页 |
| 致谢 | 第151页 |
